离子交换层析速问速答

笑看风云

离子交换是根据样品的带电性质进行分离的技术，也是一种常用的蛋白纯化技术。今天我们来看一些离子交换的速问速答，更深入的了解离子交换吧。

01
离子交换层析分为哪几种？
离子交换层析可以根据配基的不同可以分为阳离子交换层析和阴离子交换层析。阳离子交换柱可以吸附带正电荷的蛋白，阴离子交换柱可以吸附带负电荷的蛋白。

02、选阳离子还是阴离子？
蛋白是两性分子，具有等电点PI。当缓冲液的PH值低于蛋白等电点PI，蛋白带正电，选阳离子交换柱；当缓冲液的PH值高于蛋白等电点PI，蛋白带负电，选阴离子交换柱。

03、强和弱的区别？
强离子交换剂载量在很宽的PH范围内保持恒定，弱离子交换剂载量会随着PH而变化。首选强离子交换剂，当选择性不够好时，尝试弱离子交换剂。

04、如何选择缓冲液PH值？
建议选择PH6-8的中性缓冲液。可以使用和等电点相差1个PH的缓冲液作为初始尝试，如果要达到最好分离效果，一般需要摸索PH条件。

05、如果不知道蛋白等电点？
大部分蛋白等电点低于PH7，可以使用Q柱先做尝试，缓冲液使用PH7。也可以选择离子交换试剂盒做摸索。

06、缓冲液的配置？

参考说明书，注意缓冲液B加了氯化钠之后再调PH。

07、初次实验标准条件？
Start buffer A：20-50 mM
Elution buffer B：20-50 mM + 1M NaCl

08、样品不结合？
1、样品盐浓度太高；2、优化PH；3、buffer是否含有带电物质（如去垢剂）；4、柱效下降，CIP清洗

09、结合洗不下来？
1、增加洗脱液盐浓度；2、蛋白稳定性不好，已在柱上变性沉淀；3、优化PH值

10、纯度不够
1、线性梯度洗脱；2、优化buffer条件；3、使用更高分辨率产品；4、增加分子筛，疏水等多步纯化



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