一文简述Western Blotting与蛋白质组学关联

balabala

与分子生物实验经常打交道的小伙伴们，对于Western Blotting这个实验应该并不陌生。
它作为免疫学中三大实验之一，是生物医药科研人员必须要掌握的实验之一。
WB，是Western blotting的缩写，即蛋白质印迹法，又称免疫印迹（immunoblotting）。
其主要原理是利用电泳分离不同组分，再用印迹技术将蛋白质转移到特定的膜上，以抗原-抗体特异性结合原理，利用抗体作为探针，从而达到检测复杂样品靶标蛋白的目的。
Western Blotting的大概实验流程如下：



WB实验流程图

我们可以很清楚的看到，WB实验的流程较为繁琐，操作起来比较复杂，从蛋白样品的提取到蛋白含量检测、凝胶配制、上样、电泳、转膜再到封闭及抗体的孵育，每一步造成失误都有可能导致实验失败。
最重要的是WB只能实现蛋白的半定量，且只针对某单一蛋白的检测，无法大规模对多个蛋白进行绝对定量的验证。
说到这里，我们就不得不说出我们今天想要讲解的重点：PRM蛋白质组学。
那什么是PRM蛋白质组学呢？
PRM（平行反应监测，Parallel Reaction Monitoring）是一种靶向蛋白定量验证技术，PRM是基于高分辨质谱监测，二级全扫描谱图用于定性分析，选择其中最佳的子离子提取离子对即可完成定量分析。
可以同时对几十种蛋白质进行高通量、大规模绝对的定量分析，且无需抗体。



PRM蛋白质组学技术流程



WB与PRM技术对比图

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