我想做流式细胞检测，有没有好的推荐？

青草

我想做流式细胞检测，有没有好的推荐？
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队长是我

PART.01   流式细胞术


       流式细胞术（flow cytometry，FCM）是利用流式细胞仪对流动中的单个细胞或生物颗粒进行检测的生物技术，对单细胞荧光信号定量测量具备高通量、多参数、高灵敏度、高精确度的特性，可根据参数区分获得不同性质的细胞进行研究。
       一般根据目的和技术又将流式细胞术区分为流式分析检测和流式分选两个类别。流式细胞检测可以快速、准确地测量细胞大小、内部颗粒的性状，还可以检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内核酸含量等，其检测结果以直方图、二维图或假三维图表示，而流式分选则可以高效地对细胞群进行物理分离、然后可展开进一步的实验研究。无论是哪一种方法都广泛应用于细胞生物学、免疫学、临床医学、基础科学研究等研究领域。
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PART.02   流式细胞检测
      纳博生命提供流式细胞检测服务可用于纳米抗体亲和力检测验证、细胞内活性氧水平检测分析、细胞表面抗原与抗体结合测试、线粒体膜电位检测分析、细胞凋亡与周期检测等等，最快可两天结项。

主要流程如下：
    - 样品制备：对于不同来源的样品根据其特点选择合适的细胞分散方法，制成细胞悬液；
    - 荧光标记：荧光素偶联抗体标记；
    - 流式分析：根据客户要求设置好空白对照、阳性对照进行实验；
    - 结果分析：根据客户需要提供散点图、直方图、等高线图、假三维图等。
<hr/>PART.03   流式检测样品制备方法推荐
细胞表面抗原与纳米抗体结合检测（APC标记抗体）
      1、胰酶消化细胞，300g离心3min，收集待测细胞2×105个；
2、用2%BSA将待测细胞进行重悬；
      3、置于孔板振荡仪上，孵育1h，离心，PBS清洗3遍；
      4、加入50µL稀释好的一抗未标记抗体，置于孔板振荡仪上，孵育2h，离心，PBS清洗3遍；
      5、加入50µL荧光标记（APC）标记的二抗，置于孔板振荡仪上，孵育1h；
      6、离心，PBS清洗3遍，根据细胞量加入合适PBS进行重悬细胞；
      7、用流式细胞仪检测荧光值，每管计数20000个细胞。



（红色为阴性细胞，蓝色为阳性细胞）

<hr/>细胞凋亡样品分析（Annexin V和PI双染）
      1、胰酶消化细胞，300g离心3min，收集待测细胞5×105个；
      2、用4℃预冷的PBS洗3次，用100μL结合buffer将待测细胞进行重悬；
      3、避光条件下加入5μL Annexin V-FITC荧光标记蛋白和10μL PI染液，轻轻混匀，室温避光孵育10 -15min后加入结合buffer，混匀后放置于冰上；
      4、在1小时内用流式细胞仪检测荧光值。
Tips：因涉及到细胞多次清洗，为避免损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。



十字门注释：Q1门表示机械性死亡；Q2门表示晚凋；Q3门表示细胞早期凋亡；Q4门表示活胞。

<hr/>       纳博生命在十余年自主研究实验中获得了丰富的经验，自主研发的高通量全自动纳米抗体筛选平台可实现“零人为干扰”的高效自动检测。拥有1400余㎡独立自主实验室配备搭载双激光器（红638nm/蓝488nm）的层浪生物LongCyteTM系列流式细胞检测仪，可快速准确地对细胞及生物颗粒进行定量测定与分析，根据客户需求定制实验方案，满足客户需求。



层浪LongCyteTM

      纳博生命专注于纳米抗体的开发、改造与应用，拥有符合实验动物标准的羊驼繁育基地与独立实验基地。致力于构建产、学、研一体化的实验公共服务平台。希望能为广大生物科研机构、医药研发企业和创新团队提供更专业、性价比更高的实验服务。欢迎各方研发人员与我们交流联系。

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在流式细胞术领域，无论是常规的细胞检测，还是高复杂性的流式细胞术应用，贝克曼库尔特都致力于通过给客户提供需要的技术来获得可重复的结果从而帮助客户达到实验目标，如流式细胞分析试剂等产品及技术。
对于要求低耗材高成果的诊断型实验室，贝克曼库尔特的解决方案简化了工作流程，同时避免了耗时且易出现高成本失误的手工操作步骤。
同时，贝克曼库尔特的技术支持和售后服务为您提供及时可靠的技术支持和售后保障。

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通过使用使用流式细胞仪可以对血小板进行信号传递、细胞骨架架构、糖蛋白结构、血小板活化反应，糖蛋白缺陷检测，RNA含量，血小板抗体等分析检测。



流式细胞仪价格

  使用流式细胞仪进行血小板分析检测时需要注意以下几点：
一)抗体的选择
选择CDWorkshop中的单克隆抗体.单克隆抗体反应特异性高,非特异性结合少,
但由于血小板富含FcRⅡ(CD32,Fe Ⅱ受体),而Fc受体对不同抗体亚类具有不同亲和力,所以在业类选择上,对于人的抗体以选择IgG1为好.
二)抗凝剂的选择
尽量避免使用肝素;EDTA在室温20~25℃时其抗凝效果与枸椽酸盐无差别,但在
37℃时,EDTA就会影响蛋白结构及刺激血小板活化.
三)标本的采集
般采少量外周血,收集在玻璃容器或塑料容器中,采血中避免组织液流人血液中;
防止气泡产生;并使用大号针头(如18号).尽量减少化学、物理的激活因素对血小板
的活化作用.标本的放置温度以15-25℃为宜,4~10℃以下血小板的外形发生改变.
四)抗体标记物的选择
我们知道,FITC和PE标记是最常用的在488nm激发下作为双标记使用的试剂,
PE的荧光强度比FITC强.因为在用单色测定中CD62p和CD63在静止血小板上均为弱表达,检测这两个抗原时用PE标记为宜.而当CD62p和CD63配合一个高强度表达的抗原CD41、CD61或CD42b作为双标记时,CD62p和CD63却宜使用FITC标记.
五)样品固定
使用流式细胞仪同样可以检测样本中的血小板反应力及活化进程；样本的固定的主要目的为了减少血小板的体外活化,在进行样本固定时，也可能会破坏部分蛋白质结构,从而增加非特异性染色.所以,除了做体外剌激血小板活化研究和不能及时处理标本外,都应该做标记之后再固定.样本固定剂一般使用0.5%~1.0%的多聚甲醛即可.
细胞生物反应器-移液器-振荡培养箱-实验室仪器设备-阿尔法六)缓冲液
在孵育和洗涤过程中经常会使用PBS(0.01 mol/LpH7.2)+BSA.但如果是分析血小板活化过程，由于Tyrode缓冲液中主要含有镁离子和grape sugar,这两种物质有利于减少血小板的体外活化。所以在洗涤的时候,也可以使用Tyrode缓冲液。
七)仪器的设置
老款的流失细胞仪需要利用荧光微球微球进行仪器光路和光电信号的控制,使仪器保持相对稳定、灵敏的状态.当数据采集完成以后,散射光和荧光需要使用对数放大,这时通过调节散射光电压,使细胞群分布尽量保持在中间位置.调节荧光电压,使样品继发荧光强度落在对数值1内,也可以使用荧光微球或者使用CD4-FITC/CD8-PE双色标记单抗来做荧光补偿.标本至少分析5000个细胞,而且每秒流速不宜超过1000~1500个细胞.



数据分析

（八）数据分析
在活化血小板(CD62p、CD63)等少量表达抗原的检测中,阈值的设定一般是使
非特异性染色的比例控制在1%~2%的范围内,但要对非特异性染色进行正确的设定依靠仪器的敏感度及试剂的质量.当测定的抗原本身为高表达而要判断抗原表达的高低度时,需要依据平均荧光强度。



苏州阿尔法

苏州阿尔法生物13年专注于生物实验室仪器设备的供应，所提供的Luminex系列细胞分析仪主要包括Amnis CellStream流式细胞仪，FlowSight多维全景流式细胞分析仪；Guava easyCyte微毛管细胞分析仪，Amnis ImageStream x Mk II量化成像分析流式细胞仪以及Muse细胞分析仪等广泛应用于细胞周期检查，抗体识别，细胞凋亡检测，细胞外泌体检测，细胞结构研究，以及血小板细胞分析等等细胞生物学领域。