分子检测技术原理及企业---RPA/LAMP/NASBA/TMA

笑看风云

RPA的技术原理及国内相关企业介绍



RPA反应原理图

技术原理：具有链置换活性的DNA聚合酶不具有5’->3’的核酸外切酶活性。外侧引物结合在模板链上，在聚合酶作用下向下游延伸，遇到下游内侧引物延伸合成的双链时，因不具有5’->3’的核酸外切酶活性，无法将内侧引物的合成链切除，只能继续在聚合酶作用下，将内侧引物的合成链置换出去，形成置换链。
关键蛋白：重组酶、单链结合蛋白、 DNA聚合酶
温度：39-42℃
时间：5-20mins
RPA相关企业介绍：
1、国外的就不用说了，TwistDx公司预算充足即可购买，可能货期会比较长；
2、国内近几年有很多很不错的厂家也在做RPA体系，国产替代，例如做的比较好的：安普未来（常州）核酸恒温快速扩增MIRA技术，有自主专利，主要做原料的，原料酶做的体系还比较稳定，还开发了一些配套仪器，很不错；杭州众测/江苏奇天也是专门做恒温扩增试剂的，技术命名为RAA，也是国内比较早做RPA体系的企业，产品也是可以；江苏先达基因恒温扩增ERA技术，试剂做的也不错，还有开发一些仪器；还有一些比较新的企业比如苏州基因诺CEEA技术、无锡乐尚生物RAPID也都在做。
当然除了上述专门做RPA体系的企业，国内还有很多做蛋白的公司自主研发并售卖RPA体系的单酶，或者做成恒温扩增体系，例如南京巨匠生物EIA体系、广州美格生物RDA恒温扩增体系、珠海宝瑞生物EMIA恒温体系、北京德奥平售卖RPA单酶、江苏东抗生物、菲鹏生物等，当然也有一系列的大牌公司代理商比如武汉君诺德、艾迪基因、深圳易致生物、南京沃博生物等。还有一些企业可能没挖掘到，深圳市麒御生物、上海速创诊断、宏伟特斯等，当然也有一些大牌企业通过恒温扩增检测拿到注册证的，比如上海伯杰恒温扩增一体机X8、郑州中道、安普未来等。
LAMP技术原理及相关企业介绍
反应原理：LAMP恒温扩增技术，在65℃恒温条件下，DNA双链处于动态平衡状态，在Bst聚合酶（链置换功能）与4条引物（FIP、BIP、F3、B3）的作用下完成扩增。
关键蛋白：BstDNA聚合酶
引物数：4~6条
温度：65˚C恒温条件
时间：30～60分钟
检测方法：浊度法、染料法、探针法等
优点：较高的特异性和抗干扰能力；反应体系稳定可靠；
结果的鉴别简便。



LAMP反应原理图

LAMP相关企业介绍
北京蓝谱生物，主营LAMP®技术专利产品及仪器、LAMP检测浊度仪、LAMP®恒温扩增基因检测系统，授权的日本荣研化学株式会社环介导等温扩增（LAMP®)法专利产品在中国地区的总经销代理企业；开发结核分枝杆菌检测系统（仪器+试剂），跟广州迪澳生物应该是有些小摩擦；哈尔滨新海基因、上海翊圣生物、北京博奥晶典主要做微流控芯片的、百康芯生物、深圳麦科田生物、珠海银科等都有LAMP相关的恒温扩增产品。
NASBA(依赖核酸序列扩增)技术原理及企业



NASBA技术原理

技术原理：
       其扩增过程包含非循环相和循环相，在非循环相中，DNA或RNA经变性后首先与带有T7转录启动子序列的引物1结合，再在AMV逆转录酶和RNase H以及另一条引物2的参与反应中，形成带有T7转录启动子序列的双链DNA，该DNA可与T7 RNA聚合酶结合并转录形成RNA；反义RNA即可进入循环相作为模板，在3种酶和2条引物的共同作用下形成越来越多的RNA。
关键蛋白：AMV逆转录酶；T7RNA聚合酶； RNase H；
温度：42˚C
时间：90min
结果读取：凝胶电泳/荧光法
优点：特异性高和灵敏度高。
缺点：反应成分比较复杂、需要3种酶使得反应成本较高；需要65℃条件作用5mins，去除RNA的二级结构。
NASBA相关企业：
武汉中帜生物，专业提供快速分子诊断试剂及配套仪器产品及呼吸道疾病核酸检测整体解决方案；国内独家进行病原体核酸RNA多重检测和即时检测。RNA的恒温检测仪器、RNA恒温检测POCT一体机。厂家优势亮点：肺炎、甲乙流、新冠、肠道恒温扩增试剂盒那注册证。目前国内好像就这一个。
SAT恒温扩增技术及相关企业：
技术原理：同一温度下，首先通过M-MLV反转录酶产生靶标核酸（RNA）的一个双链DNA拷贝，然后利用T7RNA多聚酶从该DNA拷贝上产生多个（100～1000个）RNA拷贝；每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环；同时，带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异结合，产生荧光。该荧光信号可由荧光检测仪器实时捕获，实时反映扩增循环情况。
SAT相关企业：
上海仁度生物，基于SAT方法开发试剂盒：生殖、呼吸道、肠道、食品安全、血源传染性疾病；配套SAT全自动核酸分析仪，恒温检测仪。厂家优势亮点：国内独家专利，专注RNA恒温扩增；检测试剂盒及扩增仪器拿证；核心原料酶+试剂+仪器+第三方检测服务”一体化经营模式。
CPA（交叉引物恒温扩增技术）技术原理及相关企业：
CPA是2008年由优思达公司独立研发成功的一种新的核酸恒温扩增技术，也是中国首个具有自主知识产权的核酸扩增技术。它针对目的基因4或5个区域设计4或者5条特异性引物，利用具有链置换特性的Bst DNA聚合酶、甜菜碱，在63 ℃左右条件下进行高效、快速、高特异地扩增靶序列。
企业：杭州优思达生物，呼吸道、生殖道恒温核酸扩增试剂盒；宠物全套试剂盒；松材线虫试剂盒；核酸提取仪；核酸检测仪；PCR检测仪。新冠、结核分枝杆菌整体解决方案；样本采集耗材、前处理；核酸分析仪/结合/甲乙流/新冠/肺支/CT/NG获得注册证等。
以上都是在恒温扩增领域比较优秀的企业了，国内分子检测也是遍地开花，希望后续会不断研发解决更多的问题。
下一次可以浅谈一下RPA体系在实验过程中有哪些问题有待解决。。。

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