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[分享] LB培养基的配制方法及使用

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发表于 2024-9-23 17:54 | 显示全部楼层 |阅读模式

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LB一般被解释为Luria-Bertani,然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法,这个名字来源于英语lysogeny broth,即溶菌肉汤。LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称普通培养基,含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。
  酵母提取物:酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提,再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末,其中氨基酸含量30%以上,总蛋白50%以上,核苷酸10%以上,广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。
  胰化蛋白胨:一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的白色粉末,含有丰富的氮源、氨基酸等。
  酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压),其次是提供无机盐。
  在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。<a href=http://www.huankai.com/>固体培养基</a>http://www.huankai.com/中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
  由于这种培养基多用于培养细菌,因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。
LB培养基配方(每升)
  酵母提取物 5g
  胰化蛋白胨 10g
  氯化钠 10g
NaOH调pH至7.0,121℃、20min高压灭菌。
LB固体培养基
LB培养基 1L
  琼脂粉 15g
NaOH调pH至7.0,121℃、20min高压灭菌。
  有时需在培养基中添加抗生素,琼脂凝固点为40℃,所以添加抗生素最好在50~55℃。
LB培养基用途
  用于一般细菌培养,特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。
LB培养基使用原理:
  蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。
LB培养基配制方法
  配制每升培养基,应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入:胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解。用5mol/LNaOH调pH至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。
LB固体培养基1L和液体一样,加15g琼脂粉,一定要在温度降下之前加好抗固态LB培养基生素,并且倒好板。
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原文地址:https://zhuanlan.zhihu.com/p/27711102
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