微生物检验常用染色方法合集

会里很

临床微生物学检验文章合集：

临床微生物学检验——细菌篇：

临床微生物学检验——真菌篇：

临床微生物学检验——菌落观察篇：

临床微生物学检验——染色方法篇：

一、革兰染色

1.染色原理

革兰染色可将细菌分为革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）两大类，是细菌学最经典、最常用的染色法。
革兰染色的原理是基于细菌细胞壁特殊化学组分的不同。
通过初染（结晶紫）和媒染（碘液）后，细菌细胞内形成了不溶于水的结晶紫一碘大分子复合物（紫色）。
G+的细胞壁较厚、肽聚糖含量较高，故在用乙醇洗脱时，肽聚糖网孔会因脱水而明显收缩，结晶紫与碘复合物仍牢牢阻留在细胞壁内，使其仍保留紫色。而G-则相反，其壁薄、肽聚糖含量低，遇乙醇后，肽聚糖网孔不易收缩，复合物容易溶出细胞壁，因此乙醇脱色后，细胞又成无色。复红复染后，G-将被染为红色。
2.标本类型：痰液，脑脊液，肺泡灌洗液、分泌物等。

3.染色结果：G+呈现紫色；G-呈现红色。




革兰阴性杆菌，红色。



革兰阳性杆菌，紫色，涂片稍密集，细菌未展开。



革兰阴性球菌，红色。



革兰阳性球菌，紫色。典型的肺炎链球菌，瓜子形，坦面相对。



革兰阳性球菌，紫色。典型的金黄色葡萄球菌，葡萄串状排列。



这是真菌革兰染色后的形态，呈蓝紫色，革兰阳性球杆状，可见真菌孢子。

4.临床意义

• 对病原菌进行初步鉴定，例如形态典型的肺炎链球菌（G+双球菌，呈矛头状、钝端相对、尖端向外，常成双排列）和金黄色葡萄球菌（G+，葡萄状排列）。
  
• 为临床用药提供参考，阳性菌与阴性菌的用药不同。
  
• 为细菌鉴定和药敏试验提供参考，目前普遍使用的细菌及药敏鉴定仪需要先区分细菌的革兰染色大类，若为G+则用阳性细菌鉴定卡。
  

革兰阴性细菌鉴定卡



革兰阳性细菌鉴定卡

二、抗酸染色

1.染色原理

分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，因此，分枝杆菌一般不易着色。
可一旦着色后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
2.标本类型：痰液，肺泡灌洗液，脑脊液等。

3.染色结果：抗酸细菌呈现红色。




蓝色背景下可见红色条状细菌，即抗酸杆菌。

4.临床意义:辅助诊断分枝杆菌感染。

三、墨汁染色

1.染色原理

新型隐球菌的荚膜较厚，一般不易着色，同时菌体折光性较强，用墨汁负染法可在黑色背景下看到透亮的菌体。
2.标本类型：脑脊液、肺泡灌洗液。

3.染色结果：黑色背景下菌体透亮折光。




此图为镜下实拍，可能是墨汁和光源的缘故，背景偏红。但细菌及其荚膜清晰可见。



此图来源于百度，可见黑色背景下折光透明的菌体和宽厚的荚膜。

4.临床意义:辅助诊断隐球菌感染。

四、乳酸酚棉蓝染色

1.染色原理

乳酚棉蓝染色法常用于真菌的染色与观察。苯酚试剂用作固定，增强菌丝、孢子与染色剂的亲和力，提高染色效果，另有消毒作用。
乳酸试剂用作调节PH，增加溶解性。
苯胺蓝试剂作为着色剂，起到染色的作用。
2.标本类型：真菌培养基上的霉菌。



3.染色结果

酵母菌细胞、菌丝体和产孢结构等皆可被染成亮蓝色；背景为暗淡的蓝色。



可见顶囊和分生孢子。

4.临床意义:辅助诊断真菌感染。

五、真菌荧光染色

1.染色原理

荧光染料中的重组几丁质酶可与真菌细胞壁成分几丁质结合，绝大多数真菌含有几丁质，特殊荧光素标联的真菌酶可作为组织化学标记物，在340-380nm波长的荧光显微镜下显示亮蓝色。





此图来源于网络。

2.标本类型

各类疑似真菌感染的微生物学检测样本，如脓液、组织、皮屑、痰等。
3.染色结果：荧光下呈现蓝绿荧光，可以清晰地看到酵母菌还是丝状真菌，是有隔菌丝还是无隔菌丝。

4.临床意义:辅助诊断真菌感染。

六、六胺银染色

1.染色原理

六胺银染色又称（Periodic-acid silver methenamine）PASM染色。主要用于组织基底膜和真菌（主要应用于新型隐球菌、毛霉菌、曲霉菌、组织胞浆菌、马尔尼菲青霉菌、放线菌等）的染色。
其原理是用高碘酸与组织发生氧化，使组织的基底膜或真菌内的粘多糖暴露醛基，醛基与六胺银发生作用，将其还原成黑色的金属银，再利用硫代硫酸钠除去未反应的银离子。
2.标本类型:肺泡灌洗液。

3.染色结果

肺孢子菌包囊呈圆形、椭圆形或不规则形，囊壁染成棕色或棕黑色，部分包囊可见括弧样结构，可见核状物。其他真菌的菌丝及孢子呈棕黑色或黑色，结构清晰明显，背景为绿色。


4.临床意义:辅助诊断耶氏肺孢子菌感染。

七、其他染色方法

1.芽孢染色

芽孢属于细菌的特殊结构。虽然芽孢在革兰氏染色片中可以看到，但不易清晰观察。可用芽孢染色法，使芽孢与菌体呈现不同颜色，便于观察。主要的芽孢染色法有孔雀绿染色法和石碳酸复红染色法。
2.鞭毛染色

鞭毛是细菌的运动器官，非常纤细，超出了光学显微镜观察极限，因此通常情况下在显微镜下观察不到。鞭毛染色一般分银盐法和复红沉淀法两种。
3.镀银染色

镀银染色可用于梅毒螺旋体染色。
由于梅毒螺旋体具有亲银性，镀银染色法能将梅毒螺旋体染成棕褐色或黑褐色，形态清晰易辨。
小结

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