如何理解 PCR技术可以检验目的基因是否插入某细菌（举个例子）的DNA上？

心中u你

我理解的PCR是能够体外扩增 DNA, 但是课本里面说他还可以检验目的基因是否插入那个啥里面

原文地址：https://www.zhihu.com/question/580337062

同花顺

pcr全称是聚合酶链式反应，主要作用是放大扩增特定的dna片段。（来自百度百科）
假如我们尝试把A基因转化到B细菌里，我们会用到质粒（一种小型环状dna）。
（要把大象装冰箱，拢共分几步？）
第一步先把质粒用酶切开
第二步把A基因用酶连到质粒上
第三步将质粒转到B细菌中检测A基因
这里就是问题关键，如何检测？
这里就需要pcr出场，之前B细菌是没有A基因的。因此我们设计一对引物p，能够特异性的识别A基因，在pcr仪中开始扩增。
pcr仪中：
先高温把双链dna变成单链dna，
再低温引物p去寻找A基因（叮，找到了/嘣，没找到），
最后合适温度开始复制扩增。
下面会有两种结果
第一种是A基因在B细菌里面，你就会获得一大堆A基因片段，去跑琼脂糖凝胶电泳会看到明亮的条带。
第二种比较坑爹，A基因不在B细菌里，你的琼脂糖凝胶里就空空的，啥都没有（好了，你可以重新做了）。
也就是说，当你在看到凝胶上亮亮的条带时，就说明A基因在B细菌里。
但是，这只是定性的看。如果想看A基因的序列有没有问题（突变），就需要送测序公司进行测序，然后获得测序片段，与数据库中的A基因序列进行比对。
碱基完全一致，OK，结束，进行下一步实验。
碱基不完全一致，好的，重做，再来一遍。
End～

同花顺

• 目的基因不是插入细菌，而是转化进细菌。转化的意思通俗上讲，就是进入。
  

2. 目的基因不是直接进入细菌，而是先要连接在载体上。


3. 大肠杆菌一直不断复制，目的基因的量也不断增加。
3. PCR首先预变性，这一步需要95°C的高温，可以使大肠杆菌裂解，载体就暴露出来了，目的基因也就暴露出来了，然后可以用pcr程序检验目的基因。
求赞同求赞同！

大力水手

要理解这个问题，可以先去了解一下pcr技术的原理。聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加而且非常灵敏。如果目的基因在细菌的DNA上，相当于基因组上有我们的目的基因的模板，当加入引物 pcr反应体系后，在适当的反应条件下就可以进行扩增啦。
反之，如果细菌DNA上没有目的基因，那么即便加入再多的引物和反应体系等，都不会扩增出来目的条带。

长长的路

说一个比较常见的，连接T载体，假设把一段序列连接到t载体上，然后转化大肠杆菌，此时用T载体的序列作为引物(一般用M13)进行pcr扩增，如果目的基因已插入，那么扩增出的片段长度应该是(目的基因长度＋M13上下游引物长度)，如果没插入，那么扩增片段长度是M13上下游引物长度。

卡卡

比如提细菌的DNA，然后以插入序列为靶序列来跑PCR，如果能扩增出来，就说明样品中的确存在插入的序列。