关于流式细胞仪你了解多少？

千姿百态

关于流式细胞仪你了解多少？
原文地址：https://www.zhihu.com/question/576658184

队长是我

文献中我们经常能看见这种图，也就是流式结果分析图，美观、简单、一目了然。

流式细胞术（flow cytometry）是20世纪60年代后期开始发展起来的利用流式细胞仪快速定量分析细胞群的物理化学特征以及根据这些物理化学特征精确分选细胞的新技术，主要分为流式分析和分选2部分。

今天我们主要介绍流式分析中基本操作与技巧，首先简要了解一下什么是流式细胞术。 一、流式细胞术的3大要素
1. 流式细胞仪：现在市面上有多种型号的流式细胞仪，但其基本结构都是相同的，分析性流式细胞仪有液流系统、光路系统、监测分析系统。

（1）液流系统






（2）光路系统
光路系统始于激光器，其分类分法很多，最常用的分类方法是根据其发射的激光的波长来分，如常见的有488nm的蓝激光器、635nm的红激光器和405nm的紫激光器，不同的激光器发出的激光照射到细胞后产生的光信号会经过不同的光路系统被不同的通道接收。

流式细胞仪采集的光信号包括散射光信号和荧光信号，散射光信号也就是我们常说的FSC（前向散射光，反应细胞的大小）、SSC（侧向散射光，反应细胞的复杂程度）；荧光信号是细胞上结合有荧光素，被激光激发以后，会发射荧光信号。






（3）检测分析系统：
流式细胞仪的检测分析系统就是以通道为单位将细胞的各个通道的光信号汇总分析，最后得出样品群体中细胞的物理化学特征。

通道，我们可以理解为就是光电倍增管，有2个作用：
①将光信号转变为电子信号；
②放大电子信号。可以分为散射光通道（FSC通道、SSC通道）和荧光通道，一个激光器下可以有多个荧光通道，一个通道对应多个荧光染料，例如以beckman的DXflex机器的638nm红激光器为例，APC通道可以接收 APC、Alexa Fluor647、eFluor660荧光信号，原则上，这3种荧光素不能同时标记一个样品，否则，就无法分析该通道上的信号是来自于哪种荧光素。

另一个重要组成部分就是计算机分析系统，例如BD的DIVA系统。






二、样品细胞：流式细胞术检测的对象一般是细胞，并且是呈独立状态的悬浮于液体中的细胞，如果要检测组织中的细胞，必须先将组织制备成单细胞悬液。

三、荧光偶联抗体：样品细胞只有标记荧光素偶联抗体进而被激光照射后才能发射荧光信号，从而得到样品细胞表达某抗原分子强弱等情况。 二、流式细胞术的基本操作与技巧
1）细胞的制备、培养
2）封闭
3）荧光素偶联抗体标记
4）光电倍增管电压的设定
5）对照的设置
6）补偿调节
以体外培养的PBMC细胞为例：
1、细胞培养在96孔板中，直接收集细胞于1.5ml的EP管中，350g，4°C离心5min，弃上清；

2、然后用1ml FACS buffer重悬沉淀，350g，4°C离心5min，弃上清；

3、封闭：标记样品细胞的荧光素偶联抗体多为单克隆抗体，少数也可能是多克隆抗体，其基本结构都由两部分组成，即包含有特异性结合抗原位点的Fab段和相对保守的Fc段，抗体的特异性表现在Fab段，标记时利用Fab段的抗原结合位点与细胞上抗原分子特异性结合，从而标记并且相对量化细胞表达该抗原分子的情况。但是，有些细胞表面表达FcR(Fc receptor, Fc受体），如巨噬细胞、DC、B淋巴细胞等， FcR可以与荧光素偶联抗体的Fc段进行非特异性的结合，对结果产生一定的影响。

封闭方法1：取适量的血清全IgG抗体与样品细胞充分混匀，4'C静置15min。研究人的细胞时，若荧光素偶联抗体来源于小鼠，封闭采用小鼠血清全IgG抗体。原则是，如果流式抗体可能与样品细胞的FcR发生非特异性结合，那么在标记荧光素偶联抗体之前先用流式抗体同源的全IgG抗体进行封闭，使样品细胞表面的FcR饱和。

封闭方法2：适量的抗CD16和抗CD32单克隆抗体与样品细胞充分混匀，4'C静置 15min。CD16是一种FcR, 能够与IgG的Fc段结合，亲和力较强；CD32也是一种 FcR, 能够与IgG的Fc段结合，亲和力中等。而荧光素偶联抗体基本上是IgG抗体，所以在标记荧光素偶联抗体前可以用抗CD16和抗CD32单克隆抗体封闭样品细胞，使样品细胞表面的FcR都被抗CD16 或抗CD32单克隆抗体结合，从而阻止后续荧光素偶联抗体与FcR的非特异性结合。






4、标记相应的荧光素偶联抗体，这里以CD3-APC-Cy7、CD4-FITC为例，一般染色体系推荐100μl，CD3、CD4表达量相对较高，1μl足够了，假如有9个样本，分别取10μlCD3-APC-cy7、CD4-FITC加到含有990μl的1.5ml的EP管中，混匀后，分别取100μl加到9个样品孔中，混匀，室温、避光染色20min；

5、加1ml FACS buffer洗去未结合的抗体，350g，4°C离心5min，弃上清，用200μl FACS buffer或2%的多聚甲醛重悬沉淀，尽快上机分析。

6、电压的设定：上机分析时，确认机器没有问题后，首先就是调节每个通道的光电倍增管的电压，目的是为了区分细胞群，假如我们想研究人的淋巴细胞群，我们都知道人的PBMC含有淋巴细胞、单核细胞还有中性粒细胞等，那我们怎么把它们分开呢？这时候就要用到我们前面提过的FSC和SSC，通过调节FSC和SSC的电压，区分淋巴细胞亚群，原则就是使样品细胞或者目标细胞位于流式图的中央或者靠近中央的位置。FSC和SSC的电压确定之后就开始调节APC-cy7、FITC的电压（我们可以在铺细胞的时候多铺一个孔，染色时将CD3-APC-cy7、CD4-FITC均染上，用于FSC、SSC、APC-cy7、FITC电压的调节），原则就是使阳性细胞群和阴性细胞群尽可能的分离。






7、对照的设置：
流式实验中对照设置很重要，常见的有阴性对照、FMO对照、补偿单阳管对照。

（1）阴性对照：每一种细胞都会产生非特异性荧光，流式检测时得到的荧光信号是细胞本身的非特异性荧光和来自于细胞表面结合的荧光素的特异性荧光叠加得到的结果。所以，确定与荧光素无关的细胞自身的非特异性荧光的强弱非常重要，此时就需要设立阴性对照。下图3类阴性对照是比较全面的阴性对照，但我们实验中设置阴性对照不需要3种阴性对照全部设置齐全，一般只需要设置1种阴性对照就可以了，推荐第1类或第3类。

①  第1类"negative"表示 的是不加任何荧光素偶联抗体时得到的荧光信号，即“blank”因为没有标记任何荧光素，所以这组得到的荧光信号与荧光素无关，与细胞抗原分子是否表达无关，得到的荧光信号代表的是非特异性荧光信号（当实验要求不高、已进行预实验或者能够确定同型对照的荧光信号与不加同型对照的这种阴性对照结果一致时，就可以采用这种阴性对照的设置）；

②  第2类“抗CD69"表示的是用抗CD69抗体标记样品细胞后得到的荧光信号，虽然抗CD69抗体能够与细胞表面的CD69抗原分子结合，但是抗CD69抗体没有偶联荧光素，所以得到的荧光信号也与细胞表面是否表达有CD69分子无关，得到的荧光信号代表的也只是细胞本身的非特异性荧光，所以这种对照用于排除抗体的影响（第2种阴性对照设置方法只是一种理论上的设置方法，是为了便于理解阴性对照的设置原理，一般流式分析时不会应用到这种阴性对照）；

③  第3类"IgG1-PE"表示的是标记与抗CD69抗体同种属（来源于同一物种）且同类（抗CD69-PE中的抗体是IgGl类的）的非特异性抗体(IgGl)与PE荧光素偶联的同型(isotype)对照抗体(IgGl-PE)后，得到的荧光信号，这种同型对照抗体不能与细胞表面的CD69 发生特异性结合，所以细胞表面不会结合有IgGl-PE, 最后得到的荧光信号不是PE荧光素产生的特异性荧光信号，而是代表细胞本身的非特异性荧光，所以这种对照用于排除荧光素的影响（第3种阴性对照的设置方法，称为同型对照设置，是常规的阴性对照设置法，正式的流式图的数据都必须建立在这种同型对照的基础之上，在同型对照基础上得出的流式结果是最可靠的，尤其是对于一些阴阳分群不明显的情况下，可将同型对照作为划门的依据）。






（2）FMO（fuorescence-minus-one control）对照：即减去一个荧光抗体（一般是表达量低、背景荧光干扰强），其它组合不变，是一种特殊的阴性对照，多在研究不同细胞亚群表达某些重要的表型分子、细胞因子等时应用。如Foxp3 FMO，也就是不加Foxp3-PE，只加入CD4、CD25，与三个染料都加组相比，多出来的那部分就是Treg细胞群。






（3）补偿单阳管对照：以上面我们提到的CD3-APC、CD4-FITC为例，在这里，我们要设置PE单染管和FITC单染管，用于补偿的调节，一般单染管要求有明显的阳性细胞群，像CD3、CD4表达量都很高，阳性细胞群明显，但对一些抗原表达弱的情况（阳性细胞群基本看不到），例如CD25，这时候有必要借助补偿微球。






总结
常见对照的作用



三、注意事项
（1）在细胞制备、培养阶段，如果该培养细胞是贴壁细胞，需用先用胰酶消化细胞，然后收集待测样品细胞，离心、洗涤、封闭后标记荧光素偶联抗体即可。

（2）如果是胸腺、脾脏和淋巴结等外周免疫器官，主要由免疫细胞组成，制成单细胞悬液，只需直接将脏器经钢网研磨即可。

（3）如果是实体脏器肺脏、肝脏和肿瘤组织内含有较多的结缔组织，实体脏器细胞之间一般结合紧密，所以直接研磨脏器法无法得到理想的单细胞悬液。因此，研磨前需将脏器剪碎后加入IV型胶原酶和DNA核酸内切酶消化，消化后的组织再用研磨棒直接研磨。实体脏器研磨后的单细胞悬液以实体细胞为主，如果研究目标不是实体细胞，而是脏器内浸润的免疫细胞，可以用Percoll密度梯度离心法富集免疫细胞，然后再进行流式分析。

（4）调节电压时，如果检测的目标细胞体积较小，可以适当提高电压值，使目标细胞与细胞碎片在流式图中能够完全分离；如果检测的目标细胞体积较大，可以适当降低电压值，使所有的目标细胞群完整显示于流式图中，防止细胞群接近于流式图的边界而变形扭曲或者完全处于边界外。

（5）关于样本的封闭，并不是标记荧光素偶联抗体之前必须封闭样品，一般样品细胞与流式抗体的种属来源是不同的，如标记人的细胞的荧光素偶联抗体一般来源于小鼠，人细胞的FcR也不一定能够与小鼠来源的荧光素偶联抗体的Fc段结合，但是，也有可能因为种属关系较近，或者在一定环境条件下这种不同种属间的Fc段和FcR也能结合，实验者很难判断实验过程中这种结合是否会发生，但是在标记荧光素偶联抗体前封闭样品却可以保证这种非特异性结合一定不会发生。所以，条件允许的话，实验者最好养成封闭样品的习惯。

队长是我

流式细胞术广泛用于分析细胞表面和细胞内分子的表达、鉴定并确定异质细胞群中的不同细胞类型、评估分离亚群的纯度以及分析细胞大小和容积。




主要用于测定荧光标记的抗体检测蛋白产生的荧光强度，或结合了特定细胞分子的配体，如碘化丙啶与 DNA 的结合。

其染色过程包括从细胞培养物或组织样品制备单细胞悬液。然后将获得的细胞培养在包含未标记或荧光标记抗体的试管或多孔板中，再用流式细胞仪分析。

流式细胞仪主要有两型：

临床型（又称：小型机、台式机）和综合型（又称：大型机、分析型）。BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL，B-D公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型；EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外，还具有细胞分选功能，多用于科学研究。

流式细胞仪主要技术指标

1.流式细胞仪的分析速度：
一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞，大型机可达每秒上万个细胞；

2.式细胞仪的荧光检测灵敏度：
一般能测出单个细胞上<600个荧光分子，两个细胞间的荧光差＞5%即可区分；

3.前向角散射（FSC）光检测灵敏度：
前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小，一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～0.5μm；

4.流式细胞仪的分辨率：
通常用变异系数CV值来表示，一般流式细胞仪能够达到<2.0%，这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的；

5.流式细胞仪的分选速度：
一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上；

流式细胞仪：射流




图 1.流式细胞仪概览。鞘液使细胞悬液聚拢，依次通过激光束，一次仅一个细胞。检测器会检测前向和侧向散射光，以及染色细胞发射的荧光。
当细胞悬液通过流式细胞仪时，从小喷嘴中流出的细胞悬液在鞘液的流体力学作用下向中心聚拢。形成的细流可使细胞依次通过激光束，一次仅一个细胞（图 1）。
当细胞通过激光束时，检测器会检测细胞或颗粒的散射光。前面的检测器检测前向散射光 (FS)，放置在侧面的多个检测器检测侧向散射光 (SS)，荧光检测器则检测被染色的细胞或颗粒发射的荧光。

流式细胞仪：前向和侧向散射光的测定
细胞或颗粒通过光束并使光散射，这些散射光将以 FS 或 SS 的形式检测。FS 与细胞的大小相关，SS 则与细胞颗粒度成比例。因此，通常可根据细胞大小和颗粒度差异区分细胞群。




图 2.绿色激光打到细胞上时的光散射。光的散射方向与细胞大小和颗粒度有关。
血液样本流经流式细胞仪的情况可有力地说明散射光与细胞的关系。
尺寸和颗粒度较大的粒细胞形成一个较大的细胞群，SS 和 FS 都很强，单核细胞尺寸较大，但其颗粒度较小，因此形成一个单独的群，FS 较强但 SS 较弱，较小的淋巴细胞和淋巴母细胞也行成一个单独的群，FS 较弱。由于这两种细胞都不是颗粒细胞，因此产生的 SS 也较弱。
因此，根据不同的 FS 和 SS 可将这些细胞分成不同的细胞群。




图 3.FS 与 SS 散点图。每一个散点到代表被流式细胞仪检测到的一个单细胞，不同细胞群的特征位置依据细胞大小和颗粒度确定。参考图片出处：Riley 和 Idowu，Principles and Applications of Flow Cytometry（流式细胞术的原理和应用）*。

流式细胞仪：散射光和荧光的测定
与根据 FS 和 SS 区分细胞群类似，可根据是否表达特定蛋白区分细胞。这种情况下，通常使用荧光染料对目标蛋白进行染色。用于检测目标蛋白的荧光染料被相应激发波长的激光激发后会发射荧光。这些被荧光染色的细胞或颗粒会被单独检测。
受流式细胞仪中一组滤光片和镜子的作用，前向和侧向散射光以及染色细胞发射的荧光会被分成既定的波长并分配通道。荧光会被过滤，以使各传感器仅检测特定波长的荧光。这些传感器称为光电倍增管 (PMT)。




图 4.荧光会被过滤，以使各 PMT 仅检测特定波长的光。PMT 会将光子能量转换成电信号，即电压。
如图 4 所示，FITC（异硫氰酸荧光素）通道中，PMT 仅检测 FITC 发射的波长在 519 nm 附近的光。PE 通道中，PMT 仅检测 PE（藻红蛋白）发射的波长在 575 nm 附近的光。各 PMT 还会检测其他的荧光染料，这些染料发射的荧光波长与其要检测的荧光染料发射的荧光波长相似。
流式细胞仪中装有一组滤光片，以将相应波长的光子引导至特定的 PMT 上（图 5）。




图 5.流式细胞仪中的滤光片。带通 (BP) 滤光片允许较小范围波长的光子通过，短通 (SP) 滤光片允许特定波长以下的光子通过，
长通 (LP) 滤光片则允许特定波长以上的光子通过。双色向滤光片/镜子（如双色向 LP 镜子）面向光束 45° 角放置。
对于长通双色向滤光片，特定波长以上的光子可直接通过，特定波长以下的光子成 90° 角反射。

信号测定
当带荧光的细胞通过激光束时，会随着时间产生发射光峰或脉冲。它们将被 PMT 检测并转换成电压脉冲，这就是事件。流式细胞仪会检测总脉冲高度和面积，并将测得的电压脉冲直接与该事件的荧光强度相关联。




图 6.PMT 将检测荧光细胞每次释放的光子产生的电压脉冲面积。当没有荧光标记的细胞通过光学元件时，不会发射光子，也不会检测到信号。当荧光标记的细胞通过光学元件时，会受到激光照射并发射光子，因此检测到的电压强度会逐渐增强。随着荧光细胞逐渐通过激光束，会随着时间变化产生一段电压脉冲。
通过积分各时刻脉冲的高度值得到脉冲面积，这由模数转换器 (ADC) 的速度决定，也就是 10 MHz（即每秒 1000 万次或每微秒 10 次）。
依据事件的脉冲强度（脉冲面积）为事件分配通道。增大通过 PMT 的电压可以对信号进行放大。




图 7.利用通道号和事件数绘制的单参数直方图。X 轴为用对数表示的通道。

根据测得的信号强度为每一事件分配通道号；荧光强度越高，事件的通道号就越大。




图 8.阴性和阳性结果的荧光强度测定值。左侧的阴性结果表明没有染色的细胞且各事件的荧光强度都很低，右侧的阳性结果表明存在大量荧光强度很高的事件。
在阳性结果中，可以看出阴性对照和阳性样品间强度结果有所不同（图 9）。




图 9.人 PBMC 细胞对单核细胞设门的抗-CCR2 抗体 (ab21667) 染色结果。数据来自匿名 Abreview

抗体染色

• 直接染色：
  在直接免疫荧光染色中，将细胞与直接偶联到荧光染料（如 FITC）的抗体一同培养。该染色法仅需一步抗体培养，且消除了二抗的非特异性结合。
  
  对于包含二抗的大型抗体 - 荧光染料复合物可能被捕获而导致非特异性结合或无法进入细胞防止一抗检测的细胞内染色非常适用。
  
• 间接染色：
  在间接染色中，一抗未用荧光标记，而是通过荧光标记的二抗进行检测。第二种试剂可以是能与一抗特异性结合的抗体。此外，还可使用亲和素 - 生物素体系，这种方法将抗体偶联到生物素上，再通过荧光染料标记的亲和素进行检测。
  
  由于目前可用的偶联抗体种类很多，这种方法可以将多种不同靶标产生的未偶联一抗用于与荧光标记的二抗结合，以进行 FACS 分析。这大大提高了研究人员的可选靶标蛋白范围。
  
• 细胞内染色：
  用于流式细胞术的细胞内抗原染色方案取决于可让抗体接近内部细胞蛋白的固定和透化方法。无论何种情况，成功的染色都离不开通过抗体滴定进行的实验条件优化、使用适合的对照正确设置流式细胞仪以及优化的固定和透化步骤。
  
• 分泌蛋白的检测：
  分泌蛋白的检测十分困难，因为蛋白会在检测前从细胞中释放出来且可能快速降解。高尔基体阻断剂（如布雷非德菌素A）可用于抑制表达蛋白的分泌，使其仍保留在高尔基体中。然后再用细胞内染色法检测靶标蛋白。
  

荧光染料偶联剂的选择
给定的抗体能否从阴性信号中分辨阳性信号取决于所用的荧光染料偶联剂。
各荧光染料的相对强度一般指导原则是，从亮到暗依次为：PE、PE-Cy 7、PE-Cy5、APC、APC-Cy7、Alexa Fluor 647®、Alexa Fluor 700®、FITC、Pacific Blue 和 Alexa Fluor 488®。这是一般排序，个别抗体的相对强度可能有所差异。
高度表达的抗原通常可被检测且与阴性对照区分开来，无论使用何种荧光染料。表达较少的抗原需要较亮的 PE 或 APC 偶联剂提供的高信号背景比，以将阳性细胞完全从未染色的细胞中区分开来。
相对荧光染料强度取决于使用的仪器，因为不同仪器中的激光和滤光片组合会有所差异。因此，需要确保选用了合适的 FACS 仪器。

卡卡

流式细胞仪是一种测量层流中细胞的设备（细胞仪），其通过将每个细胞排列在鞘液中，加以激光束照射，可测量散射光和荧光，从而获得有关每个细胞的信息，包含细胞结构（如大小、粒度、表面积、蛋白质含量等）、细胞功能（如细胞活性、细胞活性、酶活性、激素结合位点等）。
一、流式细胞仪有哪些应用？

目前，流式细胞仪的在临床检验方面主要应用于血液学、免疫学、肿瘤等临床医学领域，具有检测肿瘤细胞增殖周期、多药耐药性分析、造血干细胞（CD34+）计数、网织红细胞计数、淋巴细胞及其亚群分析等多种功能。在基础医学研究领域上，可辅助细胞动力学功能研究、环境微生物分析、流式细胞术与分子生物学研究。
流式细胞仪集激光、紫外光等多光源、mAbs、荧光染料、标记技术、计算机及其软件为一体，同传统的荧光显微镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等特点，是当代最先进的细胞定量分析技术之一。

二、国外及国内流式细胞仪生产厂家有哪些？

国内流式细胞仪的设计、研发和生产开始于2010年，经过十几年的飞速发展，国内企业成果显著，推出了自主研发的具有绝对计数功能的从单激光至三激光甚至高达十三种荧光颜色的流式细胞分析仪BriCyte E6，NovoCyte系列等设备产品。
据数屿医械数据库统计，截止2023年底，获得国家药品监督管理局NMPA注册证且在有效期内的流式细胞仪共45个，其中国产产品40个。涉及国内外生产厂家共计27家，其中国内厂家22家。



图片来源：数屿医械---中国上市医疗器械产品数据库

流式细胞仪厂家分布在13个省市，其中湖南省、北京市的生产厂家最多，达8家，其次为上海、浙江、广东



图片来源：数屿医械---中国上市医疗器械产品数据库

国外流式细胞仪生产厂家目录名单及产品型号

（根据数屿医械---中国上市医疗器械产品数据库整理，完整版图片附后）


1. 碧迪医疗器械（上海）有限公司

• 国械注进20192220383
  

该产品基于流式细胞术原理，与配套的检测试剂共同使用，在临床上用于对人体血液样本进行免疫分型。该流式细胞仪由液流系统、光学系统(主要包括激光器和光学收集器。激光器包括488nm蓝色激光器，640nm红色激光器，405nm紫色激光器，组成4种不同光学配置:2激光4色(3-1);2激光6色(4-2);3激光8色(4-2-2);以及3激光10色(4-3-3))、电子系统(主要包括数据采集电子设备和流式细胞仪管理系统CMS)工作站，以及BD FACSuite临床软件(版本号:1)组成。

• 国械注进20152221424   国械注进20192222462
  

该产品基于流式细胞术原理，与配套的检测试剂共同使用，在临床上用于人体血液样本进行淋巴细胞亚群的鉴定和计数。该产品由主机、液流车、工作站和随机软件(BD FACSCanto 版本号:4和BD FACSDiva 版本号:9)组成
2. 安捷伦生物（杭州）有限公司

• 浙械注准20222221115   浙械注准20222221114
  

该产品与流式试剂联用，在临床上用于对来源于人体样本中的细胞或微粒逐个进行多参数定量分析。由主机、储液台II(或液流车)和NovoExpress软件(发布版本:1)组成，可选配部件有自动上样器。

• 浙械注准20192220121
  

产品适用于临床使用中对单细胞或其他非生物颗粒膜表面以及内部的生物化学及生物物理特性成分进行定量分析用。产品由主机、电源适配器、储液台组成。
3. 贝克曼库尔特生物科技（苏州）有限公司

• 国械注进20222220563
  

该产品与流式试剂配套使用，用于对来源于人体血液样本的细胞和其他微粒的生物性能和物理性能进行定性和定量测量。本仪器主要由主机、供气装置、数据工作站、Navios EX软件组成。其中，主机包括电源、样品区、激光和光学检测系统、液流系统组成;数据工作站主要由电脑主机、显示器、鼠标和键盘组成。主机标准配置带有32管全自动进样系统。软件发布版本: 2。

• 苏械注准20182220262
  

用于对处在液体中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数的快速定量分析。该仪器由流体容器、细胞分析仪(含CytExpert for DxFLEX软件)组成,自动进样器和自动进样器微孔板进样模块为选配件。
4. 希森美康医用电子（上海）有限公司

• 国械注进20162224393
  

该产品用于监测艾滋病人的免疫状况(HIV监测)，可进行CD4阳性T细胞(CD4＋)的绝对计数。该仪器主要由便携式主机，电源和CyView软件组成。
5. 赛雷纳（中国）医疗科技有限公司

• 川械注准20192220025
  

产品用于临床使用中对处在液体中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数的快速定量分析。产品由主机、电源适配器、鞘液废液检测模组及软件(软件发布版本为V1)组成，其中主机由液流系统、光学系统、电子系统及机械系统组成。
国内流式细胞仪生产厂家目录名单及产品型号

1. 湖南唯公生物科技有限公司

• 湘械注准20222220898
  

适用于人淋巴细胞亚群的鉴定和计数，HLA-B27的检测。由主机和外设组成，主机由光学模块、液路模块、机械模块、运动模块、控制及信号处理模块组成。外设由计算机、客户端软件(WellFlow Auto)、采血管架、试管盘、检测试剂盘组成。

• 湘械注准20212221839
  

与配套的检测试剂共同使用，用于人淋巴细胞亚群的鉴定和计数，细胞因子的检测和分析。由光学模块、液路模块、机械模块、控制及信号处理模块和客户端软件(WellFlow)组成。

• 湘械注准20212221583
  

适用于人淋巴细胞亚群的鉴定和计数。由光学模块、液路模块、机械模块、控制及信号处理模块和客户端软件(WellFlow+)组成。

• 湘械注准20202221417
  

用于人淋巴细胞亚群的鉴定和计数。由流动室和液流系统、激光源和光学系统、光电管和检测系统、分析系统组成。

2. 常州必达科生物科技有限公司

• 苏械注准20222222285
  

适用于对处在液体中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数的快速定量分析。流式细胞仪由主机、试剂台、流式细胞仪控制软件(软件名称:CytoSYS，发布版本3.0)组成。其中主机由液路系统、光学系统、检测分析系统、进样系统组成;试剂台由底座、托盘、鞘液桶、废液桶、清洗液瓶、瓶盖放置架组成。

• 苏械注准20222221435
  

适用于对处在液体中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数的快速定量分析。产品由主机、试剂台和流式细胞仪控制软件(规格型号:CytoSYS，发布版本:2.0)组成。

• 苏械注准20192221063
  

适用于对处在液体中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数的快速定量分析。产品由主机、试剂台和流式细胞仪控制软件(规格型号:CytoSYS，发布版本:1.1)组成。
3. 深圳唯公生物科技有限公司

• 粤械注准20222220334
  

用于人淋巴细胞亚群的鉴定和计数。主要包括光学模块、液流模块、信号处理和控制模块、机械和运动模块、客户端软件。

• 粤械注准20202222172
  

用于人淋巴细胞亚群的鉴定和计数。主要包括光学系统、液流系统、信号处理和控制系统、机械和运动系统、客户端软件。

• 粤械注准20202221588
  

用于人淋巴细胞亚群的鉴定和计数。主要由光学模块、液路模块、信号处理和控制模块、机械模块和客户端软件(WellFlow)组成。
4. 北京指真生物科技有限公司

• 京械注准20212220543
  

基于流式细胞术原理，通过采集液流系统中逐个细胞或粒子的荧光标记信号，实现对其生物特性的分析。由光学子系统(包括激光器、收集镜头、光电传感器)，液路子系统(包括流动室、上样针、电磁阀、样品泵、鞘液泵、废液泵)，电路子系统(包括数据采集单元、运动控制单元、电源适配器)，自动上样系统，流式细胞仪软件(软件发布版本号:V1)组成。

• 京械注准20192220511
  

该产品基于流式细胞原理，与配套的检测试剂共同使用，在临床上用于对来源于人体的血液样本中的人类淋巴细胞亚群进行鉴别及计数。产品由光学子系统(包括激光器、收集镜头、光电传感器)，液路子系统(包括流动室、上样针、电磁阀、样品泵、鞘液泵、废液泵)，电路子系统(包括数据采集单元、运动控制单元、电源适配器)，软件光盘(版本号1.0)及计算机(选配)组成。
5. 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司

• 粤械注准20142220183
  

适用于人淋巴细胞亚群的鉴定和计数，HLA-B27的检测。BriCyte E6流式细胞仪由主机和外设组成。主机主要由光学系统、液路系统、机械系统、控制及信号处理系统组成。外设由计算机、客户端软件(MRFlow)、条码扫描仪、试剂架及组件组成。
6. 桂林优利特医疗电子有限公司

• 桂械注准20222220455   桂械注准20212220178
  

产品适用于临床使用中对细胞或其它非生物颗粒膜表面以及内部的生物化学和生物物理特性进行定量分析。产品由主机、客户端软件(CyTour)、储液台、自动进样器(选配)组成。主机由光学系统、液路系统、机械系统、控制及信号处理系统、电源系统组成。
7. 天津美瑞特医疗科技有限公司

• 津械注准20232220187 津械注准20232220188
  

本产品与配套的检测试剂共同使用，用于对处在液体中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数的快速定量分析。流式细胞仪由主机(液路系统、光学系统和电路系统)、电源适配器、软件 (软件发布版本为 V1.0)和计算机(选配)组成。
8. 中生医疗科技（合肥）有限公司

• 皖械注准20232220192   皖械注准20232220131
  

适用于对处在液体中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数的快速定量分析。由主机、软件(发布版本:V1)、电源线和自动上样装置(选配)组成。其中，主机主要由机械系统、光学系统、液流系统和电子系统组成。
9. 湖南孚流赛特科技有限公司

• 湘械注准20232220984
  

本产品适用于对处在液体中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数的快速定量检测和生物特性分析。本产品由主机、储液台和流式细胞仪控制软件(规格型号:FocytoSYS,发布版本:1.0)组成。
10. 湖南凯普瑞生物科技有限公司

• 湘械注准20232220905
  

本产品适用于对处在液体中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数的快速定量分析。本产品由主机、储液台和流式细胞仪控制软件(规格型号:CBISYS，发布版本:1.0)组成。
三、国外及国内流式细胞仪生产厂家如何查询？

授人以鱼不如授人以渔，某一款医疗器械生产厂家查询可通过国家药监局或行业专业数据库进行查询，后者相对于前者来说，在查询、筛选、展示上更为便捷友好，因此笔者将介绍专业数据库的查询方法。以数屿医械为例，（医疗器械行业垂直数据平台，底层子数据库100+，收录研发、生产、企业、产品、市场、行业工具等数亿条信息数据）。在数屿医械-中国上市医疗器械数据库中，查询各类医疗器械产品及生产厂家信息方法如下：


如流式细胞仪生产厂家，可点击数屿医械---产品---中国上市医疗器械数据库，产品名称中输入“流式细胞仪”，分类目录选择“22-临床检验器械”，器械状态选择“有效”，点击“搜索”，便可得到45条关于流式细胞仪产品及生产厂家信息。


点击某款流式细胞仪产品进入详情页，可查看产品基本信息、厂家名称地址，以及该厂家的流式细胞仪创新优先医疗器械、器械审评数据、医保医用耗材代码、中国医疗器械唯一标识、抽样检查、召回、耗材中标及带量采购等十大板块内容，全面了解产品从研发到销售、监管的历史情况。


若需归整为表格，可直接进行数据导出。

队长是我

流式细胞术是一种对溶液中单个细胞或颗粒进行快速、多参数分析的技术。流式细胞仪利用激光作为光源，照射在细胞上，产生散射光和荧光信号，由检测器如光电二极管或光电倍增管读取。之后，这些信号被转换成电子信号，由计算机进行分析，并写入标准格式(.fcs)数据文件。另外，细胞群可以根据其荧光或散射光的特性进行分析或分选。
用于流式细胞术的仪器在过去的几十年里不断“进化”着，以满足越来越多的科研与临床应用需求。本文将为大家简单介绍几种流式细胞仪。
传统流式细胞仪

传统的流式细胞仪由液流、光学和电子（检测分析）三个系统组成。
液流系统主要由鞘液(通常是一种缓冲盐水溶液)构成。在一定压力下，鞘液将细胞或颗粒聚焦在一条直线，并将其输送到激光拦截点。
光学系统由激发光 (激光器)和收集光 (光电倍增管或PMTs和光电二极管)组成，产生用于分析样品的散射光和荧光信号。一系列的双色向滤光片可引导荧光到特定的探测器，以便每一个单独的荧光色素可以被检测和测量。更具体地说，双色向滤光片只允许波长较短或较长的光通过，并以一定角度反射不能通过的光。例如，450双色向长通滤光片(DLP)让波长大于450 nm的光通过滤光片，并以一定角度反射较短波长的光，发送到另一个探测器。带通滤光片只允许一定波长范围内的荧光通过。例如，450/50带通滤光片只允许波长为450 +/- 25 nm的荧光通过。
电子系统将探测器发出的信号转换成可以被计算机读取的数字信号。
常见的多激光系统通常有20个参数(FSC, SSC和18个荧光探测器)。目前，一些新的仪器正在引入5个或更多的激光器，并设置30-50个参数，但这并不常见。传统流式细胞仪使用的最常见的激光是488 nm(蓝色)、405nm(紫色)、532nm(绿色)、552nm(绿色)、561 nm(绿黄色)、640 nm(红色)和355 nm(紫外线)，还有一些不常见的激光可用于特定用途。此外，还有一些仪器已经用电子崩光电二极管(APD)取代光电倍增管(PMT)用于荧光检测，目的是提高检测的灵敏度。




流式细胞仪系统组成示意图

声波聚焦流式细胞仪

声波聚焦流式细胞仪可以使用超声波更好地将细胞聚焦于一条直线，进行激光照射。即使在较高的进样速度下，声波聚焦技术也可以精确地将细胞定位在液流的中心，因此细胞信号的变异系数较小，数据质量更高。作为对比，同样在高进样速度下，传统的流体动力学聚焦由于鞘液压力相对变小，样本流的中心部分变宽，导致信号变异系数增大、数据质量下降。此外，声波聚焦的方式允许更高的上样量，并能够减少样品堵塞。声波聚焦流式细胞仪可以利用多达4种激光和14个荧光通道对样本进行检测。




声波聚焦和流体动力学聚焦对比示意图

细胞分选仪

细胞分选仪是传统流式细胞仪中的一种特殊类型，它允许用户根据所需参数，选择特定的细胞群或颗粒群，然后将这些细胞或颗粒引导到收集容器中，以供进一步研究。
细胞分选仪对样品液流进行高频振荡，以产生液滴来分离细胞。然后，液滴被赋予正电荷或负电荷，并通过金属偏转板，在那里它们根据电荷被导向一个特定的收集容器。收集容器可以是管状、载玻片或板状(96孔或384孔较为常见)。
细胞分选仪有两种类型，石英比色皿型和喷气管型，它们的不同之处在于激光照射点的位置。石英比色皿型细胞分选仪具有固定的激光照射线路，更容易为分选做好准备。喷气管型细胞分选仪需要每天对激光照射线路进行校准，设置起来更困难，但更适合小颗粒检测。




流式细胞分选仪

成像流式细胞仪

成像流式细胞仪(IFC)结合了传统的流式细胞术和荧光显微镜系统，这允许在单细胞和群体细胞水平上快速分析样品的形态和多参数荧光。IFC可以像共聚焦显微镜或荧光显微镜那样跟踪单个细胞内的蛋白质分布，也可以像流式细胞仪那样处理大量细胞。它们在多种应用中发挥关键作用，如细胞信号传导、共定位研究、细胞间相互作用、DNA损伤和修复，以及需要对大量细胞的细胞定位与荧光表达进行协调的应用。

质谱流式细胞仪

质谱流式细胞仪结合了飞行时间质谱仪和流式细胞仪的功能。使用这种仪器时，细胞用重金属离子标记抗体进行标记，而不是荧光标记抗体，并使用时间飞行质谱法进行检测。但质谱流式细胞仪不具备FSC 或 SSC 光检测功能，因此无法使用常规方法检测细胞聚集体。此外，质谱流式细胞术不具有细胞自身荧光信号，试剂不具有与荧光标记相关的发射光谱重叠，因此不需要补偿。然而，样品在分析过程中会被破坏，因此无法进行细胞分选，并且采集速率远低于标准流式细胞仪。

用于微珠阵列分析的细胞仪

多重微珠阵列在分析小体积样品中的大量分析物方面已变得流行。简单地说，这些检测利用在特定通道中具有已知荧光量的捕获珠和由单独的激光检测到的报告分子，来量化与特定珠相关的捕获分析物的数量。

光谱流式细胞仪

多参数流式细胞术的挑战之一是荧光色素之间的补偿(或消除光谱重叠)。一种新型的流式细胞仪，光谱分析仪就是专门针对这一问题而设计的。光谱分析仪测量多色样品中每个荧光色素的整个荧光发射光谱，以创建光谱指纹。然后在分析过程中，每个光谱是未混合的，为每个荧光色素提供一个纯信号。光谱分析正逐渐取代传统的PMTs作为高维流式细胞术的检测方法。

纳米型流式细胞仪

纳米型流式细胞仪覆盖了传统流式细胞仪 200 nm 以下粒径颗粒的检测盲区，可检测纳米颗粒以及亚细胞结构，细菌，病毒，细胞外囊泡（外泌体）等，对它们的粒径、分布、颗粒浓度以及生物化学性质进行高分辨、高选择性、高通量的检测。