细胞培养基础篇-冻存

大v

今天讲的是基础篇“三部曲”的最后一篇-冻存。通常情况下细胞实验周期较长，所以总免不了要冻存一部分细胞以备后用，那我就来说下冻存时的操作步骤和注意细节。
操作步骤：
1.用移液器吸走原培养基，加入适量PBS洗1-2遍；
2.加入适量胰酶，置于培养箱中消化；
3.待消化到位后加入适量血清或完全培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min；
4.配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，转移到冻存管中；
5.将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。
注意细节：
1.冻存步骤中包含了消化的大部分步骤，注意细节相同，具体可以参考 细胞培养基础篇-传代 - 丁香园论坛
2.冻存液常规配比为培养基：血清：DMSO=7:2:1，如果细胞比较珍贵，可以调整为血清：DMSO=9:1；
3.如果没有程序降温盒，可以将冻存细胞依次放于4度1h，-20度2h，-80过夜，大部分细胞也可以适应，但原代细胞不建议这么处理；
4.冻存细胞储存在-80度中通常不建议超过半年，液氮中通常不建议超过2年；
5.细胞如果是第一次养，建议至少冻存两个批次以上，以尽量避免因为冻存问题导致细胞绝种；

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