1.PCR技术的原理与应用

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PCR技术的原理与应用

PCR的文全为(聚合酶链反应)将微量目的DNA片段扩增一百万以上，它以敏感度高，特异强，产率高，重复好，以快速简便优点迅速成分子生物学研究中最为广泛的方法。
PCR的基本工作原理:

从拟扩增的DNA分子为模版.以一对分别与模版5′末端和3′末端相互补的寡苷酸片段为引物,在DA聚合酶作用下,按照半保留复制的机制沿着模版链处延伸直至完成新的DNA合成。
PCR反应体基本成包括

• 模版DNA
  
• 特异性引物
  
• 耐热性DNA酶如taq DNA聚合酶
  
• dNTP以及含有Mg2+的缓存液
  

PCR的基本反应步骤包括：

• 变性,将反应体系加热至95度,使模版完全变性为单链,同时引物自身以及引物之间存在的局部双链也得以消除
  
• 退火,将温度降至适宜温度1-般为TM较低为50度；使引物与模DNA退火结合；
  
• 延伸,将温度升到72,DNA聚合酶以DNTP为底物催化DNA的合成反应;
  

上述为一个循环,新合成的DNA分子作为下-轮合成的模板；
PCR技术的主要用途

1)目的基因的克隆;该技术可用于: 1.与反转录反应相结合,直接从组织和细胞MRNA获得目的基因片段。 2.利用特异性引物以CDNA或基因组DNA为模版获得已知目的基因段。 3.利用简并引物从CDNA文库或基因组文库中获得具有一定副相似性的基因片段。 4.利用随机引物从CDN的文库或基因组文库中克隆基因。

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