Western Blot实验三个常见内参选择指南：GAPDH、Tubulin还是Actin？

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在Western Blot实验中，选择合适的内参蛋白对于确保实验结果的准确性至关重要。今天小曼带小伙伴们探讨三种常用的内参蛋白——GAPDH、Tubulin和Actin，并指导您如何根据实验条件选择最合适的内参。GAPDHGAPDH是在细胞代谢糖酵解中起关键作用的酶，分子量36kDa，通常表达量较高，在同种细胞或组织中的表达量一般是恒定的，且很少受外部诱导物的影响。然而，在某些特定条件下，比如缺氧和糖尿病等疾病存在时，其表达可能会发生变化，因此在这些情况下不推荐作为内参。Actin    Actin（最常用β-actin）是构成细胞骨架的主要蛋白之一，分子量42kDa，是一类形成微丝的球状多功能蛋白质。它在许多真核细胞中都有广泛且稳定的表达。根据它们的等电点分为三类（α， β和γ），一般来说，α肌动蛋白存在于肌肉中（α-骨骼，α-主动脉平滑，α-心脏），而β和γ在非肌肉细胞中很突出（β-细胞质，γ1-细胞质，γ2-肠道平滑）。适用于全细胞和细胞质样品的标准化，但在上样量较大时要注意其线性范围。Tubulin    Tubulin是构成微管网络的重要蛋白，分子量约55 kDa，微管蛋白是球形分子，参与维持细胞形态和分裂过程。它的表达水平也可能随细胞状态而变，因此使用时需要验证其稳定性。实验应用建议    在选择内参时，重要的是考虑您的实验条件和研究背景。不同的细胞类型和实验目的可能需要不同的内参。在做多组织多细胞样本对比表达量时，最好选用GAPDH作为内参，因为GAPDH是代谢类蛋白，在活组织中表达比较恒定。而beta Actin和beta Tubulin是结构蛋白，不同组织的细胞结构会有差异性。建议事先进行文献查阅和预实验，以确定哪种内参在您的实验条件下最为稳定。    没有一个“一刀切”的最佳内参选项，最合适的内参应当基于实验的具体情况来确定。希望这篇指南能帮助您做出明智的选择，确保Western Blot实验结果的可靠性。

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