亲和层析

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亲和层析发展历史
1910年，亲和层析法纯化蛋白被首次报道
1924年，Engelhart首次提出"固定化配基机理"
1951年，Campbell将抗原作为配基，固定到纤维素基质上，成功用于分离抗体
1960s，随着葡聚糖和琼脂糖凝胶被应用作为基质，亲和层析进入了高速发展期
1968年，Cuatrecasas提出"亲和层析"概念，并首次引入了间隔臂
1978年，首款商业化Protein A亲和层析推出
目前亲和层析被广泛应用于蛋白的分离纯化，其中Protein A以及金属离子螯合亲和层析使用最为普遍。
亲和层析原理
亲和层析是利用生物分子之间的特异性的相互作用，如抗原抗体，酶与底物，激素与受体，多糖与蛋白复合体等，利用他们之间特定而可逆的结合来进行分离的方法，就叫做亲和层析。
亲和层析具有高选择性，高活性，回收率和高纯度的特点，其缺点在于分离对象比较单一，对于特殊的目标物质比较难以，得到比较好的配体，这也一定程度上限制了它的使用。
有如下因素可能会对亲和层析造成影响，离子强度，pH值，抑制氢键形成的物质，如盐酸胍等，温度等。此外由于亲和层析的配体通常比较大，因此可能存在一定的空间位阻作用。当然亲和层析作用中包含了中静电，氢键，疏水，配位，弱共价键等作用力，不同的亲和层析各种作用的比重不同，因而需要考虑不同的洗脱条件，同时兼顾目标蛋白的活性。
亲和层析介质的制备
根据不同的用途，可以选择不同的机制，包括硅胶，聚合物，琼脂糖壳聚糖等。对于分子量较小，或亲和力比较低的配体，可以考虑采用间隔臂降低空间位阻，间隔臂长度需要考虑目标蛋白的分子量，但间隔壁也不宜过长，可能会导致间隔臂弯曲，使配体间的距离缩短，影响效果。
目前最常用的氢核的活化法为环氧活化，NHS活化等。以环氧和化为例，常用的环氧试剂为环氧氯丙烷，环氧氯丙烷的氯甲基和琼脂糖的羟基可以在碱性条件下脱去HCl，从而把环氧基团连接到基质上，然后再和-OH，-SH等反应连接对应的配基，当然完成连接后，需要用多余的-OH，-SH将未反应的环氧基团封闭。在合成过程中需要注意的是在碱性条件下，环氧集团不稳定，易发生水解，活化效率比较低，需要，对活化时间，pH进行优化。

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