浅谈生化诊断中的免疫比浊法

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来源：小桔灯网
作者：面气灵

导语
小编刚入行的时候，一直有个不解之谜：免疫比浊法明明是免疫原理，为什么称为生化诊断的代表技术？

什么是免疫比浊法？
免疫比浊法（Turbidimetric inhibition immuno assay）是将液相内的沉淀反应与光学仪器和自动分析技术相结合的一种分析技术。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。

免疫比浊法的分类
免疫比浊法按光路分为免疫透射比浊法和免疫散射比浊法。
免疫透射比浊法
抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。当光线通过溶液时，可被免疫复合物吸收。免疫复合物量越多，光线吸收越多。光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。
免疫散射比浊法
一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液时遇到抗原抗体复合物粒子，对光线形成折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物也越多，散射光也越强。散射光的强度还与各种物理因素，如加入抗原或抗体的时间、光源的强弱和波长、测量角度等密切相关。散射比浊法又分为速率散射比浊法和终点散射比浊法。

速率散射比浊法是一种动态测定法。通过连续动态监测单位时间内形成的抗原抗体复合物微粒产生的散射光强度，可发现某一单位时间内抗原抗体反应最快、散射光最强，即速率峰。其峰值大小与抗原浓度正相关。
终点散射比浊法是在抗原抗体反应平衡时检测形成的抗原抗体复合物的总量，过程一般需要10min以上。


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胶乳增强免疫比浊法
由于抗原抗体复合物的大小和数量问题，免疫比浊法敏感性差且检测范围不宽，催生了胶乳增强免疫比浊法。胶乳增强免疫比浊法是后来出现的一种较为稳定、准确的免疫比浊衍生技术，其原理是将待测物质相对应的抗体包被在直径为10nm－1μm的胶乳颗粒上，使抗原抗体结合物的体积增大，光通过之后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而提高试验的敏感性。


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常见干扰因素
1. 脂血：脂血样本中含有大量乳糜颗粒，乳糜颗粒具有光散射的特性，会产生浊度；

2. 黄疸：胆红素及其衍生物在特定波长下产生的本底干扰，胆红素遇光和热不稳定，易生成胆绿素、胆褐素等衍生物；
3. 溶血：血红蛋白本身吸光度值干扰；
4. 内源性干扰物质：RF、嗜异性抗体、人抗动物抗体、自身抗体、M蛋白等；
5. 标本离心不彻底和反复冻融；
6. 试剂落入灰尘；
7. 稀释杯或比色杯不干净；
8. 钩状效应：在抗体量恒定的溶液中加入抗原，免疫复合物的生成量随着抗原量的增加而增加，当达到峰值之后，则随着抗原量的增加而减少；
9. 药物干扰等。


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解决方法：
1. 适当稀释待测样本和抗原标准品/校准品；
2. 对仪器进行校准；
3. 免疫投射比浊法可通过设置双波长、样本空白、样本自动稀释等方式减少干扰：
4. 采用聚乙二醇对样本进行前处理，在检测前加入队伍血清或封闭剂等减少内源性干扰。

临床应用
自1915年Klett和Bloor采用散射比浊检测血液和牛奶中的脂肪颗粒，到1976年Hyland和Behring公司推出散射比浊仪，1977年Stenberg提出免疫比浊法，免疫比浊技术已经发展了一个世纪。目前，采用免疫比浊法的体外诊断试剂在临床上应用广泛，根据国家药监局数据显示，注册证有效的体外诊断产品多达5000多项，主要包括甘油三脂、固醇类、肝功能、肾功能、血脂类、血糖类、无机离子类和特定蛋白类等的检测。




结语
回到第一个问题，免疫比浊法明明是免疫原理，为什么称为生化诊断的代表技术？随着自动化技术的逐渐进步，临床化学与免疫学组合成的诊断技术不断发展。免疫比浊法检测项目一般在生化分析仪上完成，因此归为生化诊断。

参考来源：

1. 冯仁丰 免疫比浊的透射比浊法和散射比浊法
2. 厦门三院检验科 检验科周业务学习之《免疫比浊法》
3. 朱艳飞. 浅谈散射免疫比浊法原理与分类[J]. 世界最新医学信息文摘,2013(35):339-340. DOI:10.3969/j.issn.1671-3141.2013.35.335.
3.贾珂珂,孙文苑,聂睿,等. 免疫透射比浊法常见干扰因素的识别与应对策略[J]. 检验医学,2021,36(4):362-368. DOI:10.3969/j.issn.1673-8640.2021.04.002.

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