ELISA最全操作步骤，看完还不会的尽管找我！（上）

营养师

ELISA试剂盒包含预包被酶标板、检测抗体、链酶亲和素标记的HRP、标准品、标准品稀释液、TMB显色液、终止液、洗液、封板膜、检测缓冲液等10个成分。
实验前，请将试剂盒、样本取出；室温放置半小时，恢复至室温。
第一步：ELISA缓冲液配制 吸取5毫升10x Assay Buffer缓冲液，至50ml离心管，吸取50ml20x洗液至1升量筒，加蒸馏水至1000毫升。
第二步：标准品溶解和稀释 取出标准品，2000rpm 离心2分钟，以便管壁上的粉末集中到管底，根据标签，加入一定的蒸馏水，盖上盖子，涡旋震荡5秒，静置10-30分钟至粉末完全溶解，准备8个1.5毫升的EP管，标注S1至S7和空白，用于标准品对策梯度稀释； 加入150微升标准品稀释液，吸取150微升重溶的标准品，至S1中进行2倍稀释，吹打10次混匀，涡旋震荡5秒，从S1管中吸取150微升液体，至S2管中，吹打混匀，继续以上步骤梯度稀释至S2至S7；
第三步：稀释检测抗体 检测抗体为100x浓缩液，所以吸取50微升检测抗体，至5毫升1x Assay Buffer 震荡混匀备用；
第四步：加样 取出已恢复至室温的酶标板，加入300微升洗液，以洗去包被抗体保护剂，使包被抗体处于最佳活性状态，静置浸泡30秒。洗板结束后，立即使用酶标板，不要让酶标板干燥。
排版布局H1、H2孔为空白孔，A1、A1至G1、G2为标准曲线的S1至S7孔，每孔加入50微升的Assay Buffer，根据排版，每孔加入50微升标准品和样本，加样时，垂直悬空加入液体，加完后枪头轻轻碰液面（建议标准品，样本都做复孔），最后每孔加入50微升检测抗体，加完后用封板膜小心封好酶标板，为让抗原抗体充分接触。 将酶标板置于震荡仪上，室温300r\min 孵育2小时。

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