关于流式细胞术的那些事

虎威将军

流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）能够快速测定细胞悬液中单个细胞的生物学性质，并可以对特定的细胞进行分选收集。广泛用于细胞生物学，免疫学，遗传学，基础医学等领域。

高速客观、结果稳定、具有统计学意义，能够处理复杂样本并同时获取多种参数，是它的特点和优势。
那么，流式细胞仪究竟可检测哪些样本？都能检测什么指标？小助手今天就具体来给大家讲一讲样本的分类以及流式细胞术的应用有哪些。
1、可检测样本类型
● 外周血、骨髓、细胞穿刺液、洗脱液、实体组织、培养细胞、微生物。
2、可检测细胞结构
● 如细胞大小、细胞粒度、DNA含量与细胞周期 （可以发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断) 、RNA含量、蛋白质含量、染色体分析（可用于人类基团组研究、遗传病和癌症的诊听的研究）等。
3、可检测细胞功能
● 如细胞表面/包浆/核的特异性抗原 (评估人体细院免疫功能，对血液病的诊断和治疗检测)、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点 、细胞受体、细胞凋亡（研究多药耐药基因）等。
在了解了流式细胞术覆盖的实验类型后，就要开始进行实际操作了，有3个流式细胞实验过程中常常会踩「坑」需要提前注意，包括：
● 小心荧光淬灭：如果抗体孵育时间过长，荧光是会逐渐淬灭的。那如果不得不推迟实验可以把试管放在冰里面，延长淬灭的时间。
● 注意染色顺序：做一系列的不同染色顺序的样本，通过对染色前和染色后的各种样本进行比较分析，判断染色顺序对细胞造成的影响。
● 选好染色方案：在正式开始实验之前，通过预实验，设计出一个完美的染色方案。（考虑试剂种类，试剂质量，试剂用量，孵育时间，洗涤次数，染料浓度，染色时间及染色温度等其他因素）。
了解完流式细胞术的检测样本，那么，流式细胞术具体应用在哪些领域呢？我们也来了解下。
一、流式细胞术科研应用
01、细胞凋亡检测
在正常细胞中，细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（PS）位于胞浆侧。细胞凋亡中期，PS 外翻。Annexin V 是一种 Ca2+ 依赖的对 PS 具有高度亲和力的磷脂结合蛋白，因此可以用荧光标记的 Annexin V 检测 PS 的外翻。凋亡末期，细胞膜结构受损，原本不透膜的核酸染料（如 PI、7-AAD 等）也能进入细胞，从而产生信号。分别检测 Annexin V 和不透膜核酸染料的信号，可对凋亡中期和末期细胞的比例进行定量。
02、细胞周期检测
细胞核 DNA 含量随着细胞增殖周期时相的不同而发生变化，用 DNA 染料进行染色，DNA 含量多，荧光信号强，DNA 含量少，荧光强度低。通过对细胞瞬间的快速测定，判断细胞所处的细胞周期时相，并分析群体细胞中处于不同周期时相的细胞比例，以研究细胞的周期，DNA 复制和染色体倍性等。在肿瘤学研究中尤其常用，可以此来判断药物对肿瘤细胞影响、肿瘤的生长速度与患者预后等。
03、Th/Treg检测
通过刺激阻断剂对 T 细胞进行处理，通过检测表面或胞内标志物进行分型检测。
04、免疫分型检测
利用细胞表面或细胞内特异性抗体分子，分别选用不同标记的流式抗体对细胞进行分型和分析。
利用抗原/抗体反应原理，采用不同的流式抗体对样本进行检测可达到对不同细胞进行分型检测的目的。
05、细胞因子检测
采用 CBA 或液相芯片的方法将捕获抗体和微球/液相芯片结合，检测抗体和 SA-PE 结合通过抗原抗体特异性反应达到多种细胞因子检测的目的。
06、细胞分选
细胞分选利用流式细胞分选仪来分离纯化细胞或颗粒以供进一步分析。
07、其他
其他还包括死/活细胞检测、线粒体检测、外泌体检测。
二、流式细胞术临床应用
01、淋巴细胞亚群分析
淋巴细胞亚群分析可以了解机体在不同条件下的免疫功能状态，主要包括细胞免疫功能和体液免疫功能。在临床上，主要用于对免疫系统造成明显干扰的相关疾病的辅助诊断，分析疾病的发病机理，监控疾病的病程进展，观测疗效及监测预后等等。
主要检测项目：淋巴细胞亚群（TBNK）、T 淋巴细胞分型、调节性 T 细胞（Treg）检测等。
02、HLA-B27 检测
强直性脊椎炎患者其 HLA-B27 抗原表达为阳性，为强制性脊柱炎的重要标志物，因此 HLA-B27 的检测在疾病的诊断中有着重要意义。
03、白血病免疫分型
白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。FCM 分析白血病免疫表型具有快速、特异、准确，重复性好，能区分细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重要价值。
主要检测项目：急性白血病、慢性淋巴增生性疾病（CLD）/淋巴瘤等检测
04、造血干细胞分析
造血干细胞移植已被广泛用于治疗各种恶性血液疾病、遗传性疾病、实体肿瘤、重症联合免疫缺陷病等。移植后造血功能的重建主要取决于输入造血干细胞的数量和质量。临床上快速而准确地检测移植物中造血干细胞水平，能够确保移植成功，在造血干细胞移植中有重要意义。CD34 分子为造血干细胞的表面特异性标志物，可用于造血干细胞计数。
05、细胞因子检测
细胞因子是由免疫细胞（由单核、巨噬细胞、T 细胞、B 细胞、NK 细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白。通过对多个细胞因子的相关性分析，可达到对机体免疫状态进行整体评估，进而更好地为医师提供有价值的辅助诊断信息，为患肿瘤、免疫性疾病以及感染性疾病的患者制定更加有效的治疗方案。
06、其他
其他还包括：阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）诊断 （CD55/CD59 检测）、血小板相关分析（血小板计数、血小板免疫表型分析）、感染性疾病诊断（CD64 检测）、程序性死亡受体-1（PD-1/CD279）检测等。

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