免疫荧光定位怎么看？

会里很

我分辨不出红色蛋白是在质膜  浆  还是核膜 ？
但是我没透化  应该在质膜才对   但是看起来不太像？求助大家？



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继续前进

为了获得一张出彩的免疫荧光（IF）图像，仅仅看见靶标是不够的，我们还要知道细胞在哪、细胞中的蛋白在哪。
因此我们需要一个点亮细胞结构、标记细胞位置的工具——细胞器标记物（cell-organelle-marker）。
有了细胞器的定位，我们不仅能够快速选区、判断靶标位置，在后续图片merge过程中也能快速处理，从而获得一张漂亮的IF图片。
细胞器标记物（cell-organelle-marker）

也称作细胞器marker。一般采用某个细胞器或者亚细胞结构的基本组成成分或关键活性蛋白作为细胞器marker，它的存在可以反映该亚细胞结构的位置甚至形状。
通过荧光抗体分别定位靶标蛋白和细胞器标志物蛋白，我们可以判断靶标蛋白的亚细胞定位，同时探究其参与的生物学进程。在细胞器分离提取物的免疫印迹（WB）研究中，细胞器marker也可用作阳性对照。
由此可见细胞器标记物对免疫荧光实验数据的重要性，下面小P列举一些常见的、典型的细胞器标记物。
同时也制作了一张常用细胞器标记物海报（海报见文末），有需要的同学可以保存收藏~
1.细胞核marker

细胞核（Nucleus）是遗传信息的主要储存部位，也是整个细胞的控制中心。在细胞核里面，包含大量的组蛋白和各种遗传相关酶以及表观遗传相关酶，他们均可作为细胞核marker。
其中，组蛋白Histone H3和Histone H2A.X是最为常见和广泛使用的两个细胞核marker之一。



▲ Histone H3抗体（17168-1-AP）标记Hela细胞核



▲ Histone H2A.X抗体（10856-1-AP）标记U-251细胞核

2.核仁marker

核仁（Nucleolus）是细胞核内的一种由核酸和蛋白质组成的致密小体。绝大多数真核细胞均具有核仁，数目1-2个，甚至多个。核仁的主要功能是rRNA的合成、加工与成熟以及核糖体亚单位的组装。
核仁纤维蛋白（FBL）、MKI67（FHA域）结合核仁磷蛋白（NIFK）、核仁素（NCL）和NOP2核仁蛋白（NOP2）都是典型且常用的核仁marker。



▲ FBL抗体（16021-1-AP）标记HepG2细胞核仁



▲ NIFK抗体（12615-1-AP）标记MCF-7细胞核仁

3.核膜marker

核膜（Nuclear envelope）的有无是区分真核细胞和原核细胞的主要特征之一。真核核膜对核内外物质的进出有高度选择性，控制着细胞核内外物质和信息的交换传输。
核纤层蛋白LaminB、LaminA/C是核膜内侧核纤层的主要组成成分，也会与其他蛋白一起锚定在核膜上，通常被用作核膜marker。



▲ Lamin B1抗体（12987-1-AP）标记HepG2细胞核膜



▲ Lamin A/C抗体（10298-1-AP）标记MCF-7细胞核膜

4.内质网marker

内质网（ER，Endoplasmic reticulum）是蛋白质合成、折叠、组装、修饰、运输的重要场所，同时它还参与脂质和糖类代谢,也是细胞内储存Ca2+的主要场所。
钙联蛋白（Calnexin）、钙网蛋白（Calreticulin）、内质网蛋白（ERp72）、葡萄糖调节蛋白94（GRP94）和蛋白二硫键异构酶（PDI）主要定位于内质网中，都是常用的内质网marker。



▲ Calnexin抗体（66903-1-Ig）标记Hela细胞内质网



▲ Calreticulin抗体（27298-1-AP）标记HepG2细胞内质网

5.高尔基体marker

高尔基体（Golgi apparatus）是由数层重叠的扁平囊泡、若干大、小泡组成的膜性结构，其主要功能将内质网合成的蛋白进行加工、分拣与运输，然后分门别类地送到细胞的特定部位或分泌到胞外。
高尔基体蛋白亚家族A成员2（GOLGA2/GM130）、高尔基体重组堆积蛋白2（GORASP2）、高尔基体蛋白73（GP73/GOLPH2）、突触融合蛋白6（Syntaxin 6）以及反式高尔基体网状结构蛋白2（TGOLN2/TGN46）均是典型的高尔基体marker。



▲ GOLGA2/GM130抗体（11308-1-AP）标记Hela细胞高尔基体



▲ TGOLN2/TGN46抗体（13573-1-AP）标记HeLa细胞高尔基体

6.中心体marker

中心体（Centrosome）是动物细胞的主要微管组织中心，一般由两个中性粒组成，呈垂直排列。它在细胞极性的产生、胞间运输以及细胞分裂过程中发挥着重要作用。
着丝粒蛋白J（CENPJ）、中心体蛋白110（CP110）、中心粒周围蛋白（Pericentrin）和微管蛋白-γ（Gamma Tubulin）是最常用的几种中心体marker之一。



▲ CENPJ抗体（11517-1-AP）标记HepG2细胞中心体



▲ Gamma Tubulin抗体（66320-1-Ig）标记A549细胞中心体

7.线粒体marker

线粒体（Mitochondrion）是一种存在于大多数细胞中的双层膜细胞器，是细胞进行有氧呼吸的主要场所，也是细胞产生能量的主要源头。
凋亡诱导因子（AIF）、ATP合成酶H+转运线粒体F1复合体α亚基1（ATP5A1）、细胞色素c氧化酶IV（COXIV）、氨基甲酰磷酸合成酶1（CPS1）、热休克蛋白60（HSP60）、线粒体内膜蛋白（Mitofilin）、抗增殖蛋白（Prohibitin，又称抑制素）和电压依赖性阴离子通道蛋白1(VDAC1/Porin），都是常用的线粒体marker。



▲ COXIV抗体（11242-1-AP）标记HepG2细胞线粒体



▲ AIF抗体（67791-1-Ig）标记HeLa细胞线粒体

8.核糖体marker

核糖体（Ribosome）是细胞蛋白质合成的场所，主要由rRNA和蛋白质构成,其功能按照mRNA指令，翻译多肽链，合成蛋白质。
核糖体蛋白S3（RPS3）、核糖体蛋白L4（RPL4）以及核糖体蛋白L7（RPL7）都是典型的核糖体蛋白，也是最常用的几种核糖体marker。



▲ RPS3直标抗体（CL594-66046）标记HepG2细胞核糖体



▲ RPL4重组抗体（80959-1-RR）标记HeLa细胞核糖体

9.溶酶体marker

溶酶体（Lysosome）内含多种酸性水解酶，是细胞的消化器官，对内可将受损蛋白、细胞器降解，对外可抵御细菌病毒入侵，将外来物吞噬消化；实现资源的回收利用。
溶酶体相关膜蛋白1和2（LAMP1、LAMP2）是最常用的两个溶酶体marker。



▲ LAMP1直标抗体（CL555-65050）标记NIH/3T3细胞溶酶体



▲ LAMP2抗体（66301-1-Ig）标记HeLa细胞溶酶体

10.过氧化物酶体marker

过氧化物酶体（Peroxisome）是一种高度动态、代谢活跃的细胞器，主要参与脂肪酸等脂质的代谢和氧化应激的调节。
过氧化氢酶（Catalase）、过氧化物酶体生物合成因子1、5和14（PEX1、PEX5、PEX14）是最常见的过氧化物酶体marker。



▲ Catalase抗体（66765-1-Ig）标记HepG2细胞过氧化物酶体



▲ PEX14抗体（10594-1-AP）标记HeLa细胞过氧化物酶体

11.内体marker

内体（Endosome）是真核细胞中膜包裹的一种囊泡结构，它通过内吞作用而形成，参与以蛋白质为主的大分子分选、运输和降解。根据内吞的不同作用阶段，内体可被分为早期内体、晚期内体和循环内体。
RAB5和RAB11都是是Rab小分子GTP酶家族成员，参与细胞内囊泡再循环途径，介导膜泡从内体向质膜的运输；早期内体抗原1（EEA1）是一种与RAB5相互作用的蛋白,因此他们都是常用的内体marker。



▲ RAB5A直标抗体（CL488-66339）标记HeLa细胞内体



▲ EEA1抗体（68065-1-Ig）标记HepG2细胞内体

12.外泌体marker

外泌体（Exosome）细胞分泌的一种细胞外囊泡，它能够将核酸、蛋白质和脂质在内的多种生物活性分子从供体细胞转移到受体细胞，介导细胞间通讯和分子转运。
白细胞分化抗原（CD9、CD63、CD81）以及肿瘤易感基因101（TSG101）是比较常见的外泌体marker。
注意：单一标记物无法确认外泌体，可通过“两阳一阴”标记物组合方案来锁定外泌体，具体组合方案可参考这篇文章：
外泌体研究攻略 | 形成机理、分离鉴定手段、前沿应用进展，一文全get！


▲ CD63抗体（25682-1-AP）染人类恶性黑色素瘤组织



▲ TSG101抗体（67381-1-Ig）染Hela细胞

13.细胞骨架marker

细胞骨架（Cytoskeleton）是普遍存在于真核细胞胞质中的蛋白质纤维网架结构，主要由微丝、微管和中间纤维构成。它在细胞的形态支持、形态建成、细胞内结构的组织与定位、细胞运动、内吞与外吐、胞内运输、细胞分裂、信息传递等过程中起着广泛而重要的作用。
微管蛋白Alpha Tubulin和Beta Tubulin，波形蛋白Vimentin分别是微管结构和中间丝结构的组成成分，也是非常高频使用的细胞骨架marker。



▲ Alpha Tubulin抗体（80762-1-RR）标记C2C12细胞骨架



▲ Beta Tubulin抗体（80713-1-RR）标记C2C12细胞骨架

14.细胞膜marker

细胞膜（Plasma membrane）又被称为质膜，是包围于细胞表面的一层磷脂双分支层结构，是细胞的周界。与核膜一样，细胞膜也具有选择透过性，严格控制着膜内外的物质和信息交换。
β-连环蛋白（Beta catenin）是一种细胞骨架蛋白，主要位于细胞膜；钠钾ATP酶蛋白A1（ATP1A1）一个ATP分解和细胞内外钠、钾离子转运相关的膜蛋白。二者常被用作细胞膜marker。



▲ Beta catenin抗体（51067-2-AP）标记MCF-7细胞膜



▲ ATP1A1抗体（14418-1-AP）标记Caco-2细胞膜

15.纤毛marker
纤毛（Cilia）是一种进化上保守、突起于细胞表面的、由微管构成轴丝的毛发状细胞器。纤毛在细胞基本生命活动、组织稳态调节和动物胚胎发育等过程中发挥重要作用。
腺苷酸环化酶3（ADCY3）、ADP核糖基化因子样蛋白13B（ARL13B）、纤毛内转运蛋白20和88（IFT20、IFT88）以及乙酰化微管蛋白（Lys40）（Acetylated Tubulin (Lys40)）均可被用于纤毛标记。



▲ ARL13B抗体（13967-1-AP）和 Acetylated Tubulin抗体（66200-1-Ig）标记MDCK细胞纤毛

以上就是今天要和大家分享的15类细胞器和亚细胞结构标志物，为方便各位使用和收藏，小P这边还特别为大家制作了一份[Cell organelle marker海报]，值得收藏哦~



最后，一份常用细胞器和亚细胞结构标志物抗体列表送给大家，每一个都经过了严格且多样化的质检，还有海量的文献引用数据支持，大家可以放心使用~

卡卡

marker最准确，
省钱叠加明场初始判断。
要进一步判断marker加共聚焦三维重构呗。

感恩由您

一般来说，做定位的时候最好还是放一个对应的marker，比如核膜可以用lamin。质膜我没做过，不过应该是有对应的marker的。建议再做一次，和marker一起共染。