流式课堂 | T 细胞及其流式

检验之星

T细胞最初来源来源于骨髓中的淋巴样祖细胞，该祖细胞会形成表达CD2、CD5、CD7的T淋巴祖细胞，具有从骨髓到胸腺皮质的迁移能力。随后，在胸腺中分化、发育、成熟，根据TCR的结构链α，β，γ和δ链重排组合形式不同，会分为具γδ链的γδ T细胞和具有αβ链的αβ T细胞。
T 细胞的分类
根据所处的活化阶段不同，T细胞可分为初始T细胞（也叫幼稚T细胞）、效应T细胞、记忆T细胞。常说的杀伤性T细胞、辅助性T细胞和调节性T细胞等，都是效应T细胞。用CD69检测细胞是否被活化。
根据TCR（T细胞受体）的类型（使用和功能情况）分类，T细胞可分为γδ T细胞和αβ T细胞
γδ T细胞为非特异性免疫细胞，在人和小鼠外周血和淋巴器官中占T细胞的比例小于10%。具有TCR，不需要MHC和APC，可直接结合抗原，分泌细胞因子如IFN-γ、TNF-α、IL-2。具有先天免疫和适应性免疫的特点。被认为是免疫系统的第一道防线。
αβ T细胞为特异性免疫细胞，在人和小鼠外周血和淋巴器官中占90%以上。识别与MHC分子结合的多肽复合分子抗原。根据表面分子又分为CD4+αβ T细胞和CD8+αβ T细胞。
根据免疫效应功能，T淋巴细胞可分为：辅助性T 淋巴细胞（Th）、细胞毒性T细胞（Tc或CTL）、调节性T 淋巴细胞（Treg）等。这些细胞实际上是初始CD4+T细胞或初始 CD8+T细胞活化后分化成的效应 T 淋巴细胞。



T细胞免疫功能分类

流式细胞术
因为它可以测量许多单个细胞的多个参数。因此，流式细胞仪可以表征复杂混合物（如血液）中的许多细胞亚群。常用于T细胞的分群鉴定，具有分选功能的流式仪还可进行细胞分选。如调节性 T (Treg ) 细胞、分泌白细胞介素 17 (IL-17) 的 T 辅助 (Th 17) 细胞、树突状细胞 (DC) 和自然杀伤 (NK) 细胞等。



八色方案区分各类免疫细胞亚群 （来源Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project）

案例分享



外周血T细胞鉴定步骤



流式细胞术实验过程和工作原理（来源Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project）

外周血调节性T细胞鉴定实验步骤
1. 在离心管内加入100μL新鲜血，与2mL 1×ACK红细胞裂解液混匀，4℃裂解10min；
2. 300g离心5min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃掉上清，用移液枪轻轻吸走残液，可以得到白色的细胞沉淀；
3. 加入100μL细胞染色缓冲液，重悬细胞，与流式抗体混匀，4℃孵育30min；
4. 加入2mL细胞染色缓冲液，300g离心5min，弃掉上清，再加入200μL细胞染色缓冲液，重悬细胞；
5. 上机进行检测。



流式细胞术鉴定人外周血Treg细胞实验结果示例

外周血Th细胞诱导和检测实验步骤
取材和外周血细胞PBMC分离
实验分组
诱导处理
按照以上分组接种细胞（密度1*106个/ml），加入诱导试剂混合物，诱导1小时后加入阻断剂莫能霉素，阻断4小时后收细胞沉淀。
细胞收集
收取上述各组细胞，1000rpm离心3分钟，收集沉淀，每组用300ulPBS重悬细胞，取20ul计数，调整细胞密度为1*106个/100ul，每组取100ul，按照上面的染色指标进行染色。



流式细胞术鉴定人不同亚型的Th细胞实验结果示例

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