样本处理参考方法

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一、组织样本
1、石蜡切片
1.1、取材要求         
1）、组织固定越新鲜越好，组织离体后，需及时固定。原则上动物死亡后15分钟内完成取材并及时固定组织。
2）、组织标本不宜过大。由于所有的固定液都具有穿透力不强、侵透度不大等特点，凡是需要固定的组织，都不应太大太厚。
1.2、固定要求         
1）、固定液的选择：10%福尔马林（4%甲醛）或10%中性甲醛是病理切片常规使用 的固定液，可以兼顾常规染色和免疫组织化学。
2）、固定液的用量：一般加入固定液的量与组织体积比为10：1～20：1。
3）、组织固定：固定时间不宜太短，也不宜太长。固定时间太短，会影响组织固定的效果；时间太长，福尔马林会形成聚甲醛，影响核的染色。固定时间主要
根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为数小时至24小时。
1.3、切片保存         
做好的切片，经60℃烤片3-5小时后，可存放于4℃保存；若存放时间较长，最好存于-20℃。

2、冰冻切片
2.1、取材要求         
对于将要做冰冻切片的组织,取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存.
2.2、固定要求         
样本冰冻切片后，应立即将切片放入甲醇、95%酒精、丙酮、4%多聚甲醛等固定液中固定
2.3、切片保存         
固定好的切片，自然风干，密封好可置于-80℃、-20℃保存，但最好尽快用于后 续实验。

二、细胞样本
1、细胞块石蜡切片
对于一些细胞量较多的样品，可离心分离所需细胞，用中性甲醛固定后，制作成琼脂细胞块。然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。
2、细胞爬片
在孔板里做的细胞爬片，爬片取出后，用PBS洗涤2次，用4%多聚甲醛4℃固定15分钟，将表面液体吹干，置于-20℃保存。若短时间内开展实验，可在加固定液后， 于4℃冰箱中放置一段时间。根据研究目的，PBS洗涤可选择不做，如检测凋亡的TUNEL染色时就需避免洗涤，因凋亡的细胞在洗涤过程中有可能脱落。mRNA原位杂交：经4%多聚甲醛固定，固定液需用DEPC水配制。
3、细胞涂片
细胞学涂片常用的固定液有95%酒精、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等， 其中95%酒精较为常用。

补充说明：
1）、实验常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛，能使大多数抗原保存良好，适用于免疫组织化学。一般认为4%多聚甲醛对检测mRNA的组织固定较为理想，因其既能有效地保存组织中的靶mRNA和组织的形态结构，也可使组织具有一定的通透性。因此做原位杂交时，经常选用4%多聚甲醛做固定液。丙酮的组织穿透性和脱水行更强，常用于冰冻切片及细胞涂片的后固定，保存抗原性较好，平时4℃低温保存备用。若组织样本需做电镜实验，可用2.5%戊二醛来固定。
2）、荧光实验中，组织样本最好做成冰冻切片，因石蜡切片有较强的自发荧光，容易干扰实验结果。
3）、若客户提供切片，需了解其切片有无防脱处理。除HE实验外，其他病理实验的切片最好是防脱片，以免实验过程中出现掉片。
4）、脑组织做冰冻切片时，需先脱水处理，防止生成冰晶。脑组织先于4%多聚甲醛固定24小时（4℃）后，转移至20%蔗糖脱水处理至组织沉底（4℃），再转移至30%蔗糖脱水至沉底（4℃），之后可进行OTC包埋切片。
5）、若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验，需进行脱钙处理。若委托我公司进行脱钙处理，则需要延长包埋切片所需时间（延长时间视具体样本而定）。
6）、骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样品，实验中出现掉片的几率会较高（即使使用防脱载玻片的情况下）

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