【Western-Blotting】怎么选择高质量、高性价比的一抗？

HaHa

在《再谈抗原抗体制备及WB抗体选择》一贴中，笔者简要谈到了抗体的筛选，包括应用（Application）、物种反应性（Reactivty）、宿主（Host）、修饰（Modification）等。经过上述简单筛选后，在商业公司的官网可能仍有几种可选产品——他们来自不同克隆的免疫原、不同的物种反应性和具有不同的应用。在抗体选择中最最最重要的是效果——抗体能准确检测特定的蛋白。那么，怎样才能从中选出高质量、高性价比的一抗呢？
1、看验证结果。几乎所有的抗体公司官网均会对特定抗体的特定应用（Application）进行验证，只有经过特定实验证实确定有效的应用才会出现在官网的抗体信息栏，并会把相关实验结果及实验条件等展示在抗体网页的“图片”或者“图像”栏。通过对比实验条件和实验结果的质量，我们很容易判断相关抗体的质量。大部分常用的抗体公司，包括CST、Abcam、R&D System、ThermoFisher、Proteintech等官网的大部分相关信息基本真实；但是笔者也曾见过同一抗体相关验证结果出现在不同抗体公司的官网“图片”栏，尤其是研究不多的抗体。那么，如何判断实验结果的质量？一般来说，纳入多实验样本、阴性和（或）阳性对照等的结果更可信，就WB结果而言包含多样本（多泳道）的结果较只有单一样本（单泳道）的可信度更高。
2、看客户评价。这和我们平时的网购一样，抗体使用者也会对相关抗体进行评价，有的甚至还会提供实验条件和实验经验。
3、同一抗体的生产商可能有多个，怎样从中选择性价比最高的呢？A、根据大多数人的经验：进口厂家包括CST、Abcam、R&D System等的抗体质量较好，实验结果可靠；国产公司如Proteintech、ThermoFisher和Santa Cruz等的大部分常用抗体（比如内参、凋亡、自噬抗体等）的质量相对较高，亦能得出可靠结论。B、第三方抗体评价网站，这类网站根据既往SCI文章发表情况，统计、对比来自不同公司的同一抗体的检测、应用情况，有的网站还会展示SCI论文中实验结果（图片）；这类网站是完全免费的，包括https://www.biocompare.com/，https://www.benchsci.com等，笔者力推benchsci。C、抗体稳定性与抗体保存液，抗体能否长期使用？ 抗体保存液可含有或不含有叠氮化钠（Sodium azide）（具有抗菌作用）、PBS、甘油（即使存于-20℃仍能保持液体形态）和BSA等，也有公司（比如R&D System）提供干粉形式的抗体。如果抗体保存液包含叠氮化钠、甘油等，则无需分装抗体，抗体稳定性很好，便于长期使用；一般而言，王牌抗体公司（CST和Abcam）的稳定性优于其他公司。笔者曾用过10余年前（远远超过抗体公司推荐的保质期）购买的CST抗体应用于WB蛋白检测，实验条带杠杠的。

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