ELISA操作步骤

奋斗的小鸟

操作步骤
1、包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。
2、洗涤：弃包被液（用力拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。
3、封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。
4、洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。
5、结合一抗：用1×PBST缓冲液1∶1000稀释被检血清，每孔100μl，要设立阴性对照，37℃孵育1.5h。
6、洗涤：同上。
7、结合酶标二抗：每孔加1×PBST缓冲液1000倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀释倍数根据产品不同有所不同，可按说明书进行）50μl，37℃孵育1h。
8、洗涤：同上。
9、显色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室温避光显色10min。
10、待显色后，每孔加入50μl终止液（2mol/L H2SO4）终止反应。使用酶标仪读取450nm的OD值，以确定血清抗体水平。

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