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[分享] 质谱为什么只有MRM方法才能实现准确的定量?

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发表于 2024-9-9 08:55 | 显示全部楼层 |阅读模式
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发表于 2024-9-9 08:56 | 显示全部楼层
对于三种扫描模式的定义和区别,楼上 @Chaoyang 已经解释得很通俗易懂了。
但如果说要实现精准定量,重点其实是在减少干扰上。
我们知道生物样本成分是十分复杂的,虽然检测前会经过样本的前处理,但较难去除理化性质相近的类似物和一些干扰杂质。如果只使用一级质谱(即母离子),定量的准确度很可能会因为设备的分辨率不足或前处理过程纯化率不够而大打折扣。但如果将分析物打碎获得二级质谱(即子离子),将母离子和子离子作为该分析物的一个特定离子通道进行定量,精确度将大大提升。因为物质被打碎得到的碎片遵循一定的裂解规律(简单的可以直接参考书本,复杂的我还在学习研究中),通常分析物都有自己独特的碎片离子,所以目标物被干扰的概率大大降低。
简单来说就像要在人群中精准地找到某个人,一定是提供的信息越多(比如:短发、剑眉、双眼皮、身高188、黑色毛呢大衣、切尔西靴、某种形状的胎记等等),准确度越高
希望以上回答对题主有帮助~
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发表于 2024-9-9 08:57 | 显示全部楼层
SIM是单机质谱中的概念,因为没有子离子,就是只采集一个固定质荷比的信号,简化版的SRM。
MRM和SRM是多级质谱才有的概念,SRM是采集一对母离子和一个子离子的信号,是加强版的SIM,MRM就是同时采集多对SRM。
方法开发阶段通过MRM来筛选合适的离子对,最后留下一个SRM来定量还能提高灵敏度。
至于SRM和SIM,虽然多级质谱相比单级质谱损失了更多的目标化合物离子,但是因为SRM经过了二次筛选,能更好的排除干扰,提高了信噪比,补偿了离子绝对数量的损失,对于定量检测来说还是获益的。
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发表于 2024-9-9 08:57 | 显示全部楼层
MRM:multiple reaction monitoring,多反应监测
SRM:selective reaction monitoring,选择反应监测
SIM:single ion monitoring,单离子监测
首先我们要分清一个概念,质谱采集数据时侯有一级和二级两种采集模式。
所谓一级就是直接检测化合物的分子量,根据分子量来判断是不是这个化合物,SIM就是只测一级,单独拎一个化合物出来告诉你他分子量是多少。
二级是要把这个化合物打碎,在获得化合物分子量的基础上,打碎的二级还可以提供结构信息,对化合物进行更准确的鉴定。那做二级时候就有srm和mrm之分,看你是要只拎出来某一个化合物对他一顿狂揍(srm),还是大家一视同仁,都过来挨打(mrm)。
蛋白组学一般是将蛋白酶解成肽段,用质谱去检测这些肽段,(这里可以把肽段带入到上边的化合物去理解),一个蛋白酶解之后可能有几十个肽段,你一个细胞里几百上千个蛋白,那得有多少肽段。
所以质谱分析的时候用mrm,对多个肽段同时进行分析。
你要是只想关注一个,只对这一个肽段定量,盯住这个肽段死锤,那srm也未尝不可。
至于sim,嗯,也可以只测这一个肽段,然后用来定量,但它没有加上二级的准啊(这个准指对蛋白的鉴定)。
总的来说,二级(mrm,srm)是为了更准确的鉴定你的蛋白,而且mrm可以同时去检测多个蛋白。所以为啥不用mrm呢?
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发表于 2024-9-9 08:57 | 显示全部楼层
因为蛋白质分子太大了,获得不了足够的特征信息,MRM可以母离子子离子双重定性定量,而另外两个做不到,如果分子量小的话单极质谱就可以了,比如大部分的农药都可以用单极质谱定性定量。
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