荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization，FISH）

莺歌燕舞

荧光原位杂交技术介绍：
荧光原位杂交（FISH）是用于核型分析、细胞基因分型、癌症诊断、物种鉴定和基因表达分析的强大工具，用于显示细胞内的DNA或定位RNA。
<hr/>荧光原位杂交技术应用
※ 染色体异常检测
※ 基因图谱
※ 新致癌基因的鉴定/遗传病的诊断




<hr/>样品制备：

1） 如果测试样品是材料（细胞系、染色体制备等），则在将其应用到显微镜载玻片（涂层、印记、细胞自旋）上后，有必要将制备物以3:1的比例固定在甲醇和乙酸的混合物中10分钟。固定混合物总是在使用前准备好。固定后让制剂自然干燥，然后进行共变性和杂交。
2） 如果试样是石蜡切片，则首先需要在硅烷化或带正电的玻片上将FFPE组织切成5μm切片，在56°C下烘烤组织切片过夜，对材料进行脱蜡和预处理。
<hr/>共变性与杂交：
1） 以覆盖试样的量涂抹探头，并用清洁的盖玻片覆盖。涂胶后，有必要用合适的橡胶粘合剂涂覆盖板玻璃。
2） 在73±1°C温度下对制备的载玻片进行变性1-5分钟。
3） 在37°C的潮湿室内培养过夜。
<hr/>洗涤未结合的探针：
1） 松开盖玻片，将制剂浸入加热至73±1°C的洗涤溶液1（0.4x SSC/0.3%NP-40）中。在溶液中轻轻摇动带有制剂的玻璃约3-5秒。培养1分钟45秒。
2） 转移至洗涤溶液2（2x SSC/0.1%NP-40），再次摇动约3-5秒，并孵育30秒。
3） 将玻璃边缘贴在吸收垫上，轻轻擦干，在黑暗中自然晾干。
4） 使用含有DAPI或DAPI防褪色的安装介质（对于尺寸最大为22×22 mm的玻璃盖，使用10μl DAPI）。目的是以能够使用荧光显微镜观察细胞核的方式对细胞核进行染色。
5） 用盖玻片覆盖，并用荧光显微镜检查。





原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/584176369