western blotting 的具体步骤

风云

Western blotting是一种常用的蛋白质检测技术，其具体步骤如下：

1. 样品制备：将待检测的蛋白质样品进行提取和纯化，通常使用SDS-PAGE进行分离。


2. 蛋白质转移：将SDS-PAGE胶片上的蛋白质转移到聚丙烯酰胺膜（PVDF）或硝酸纤维素膜（NC）上。
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3. 阻断：用5%的脱脂奶粉或3%的BSA等蛋白质阻断剂在室温下阻断膜上的非特异性结合位点。



4. 一抗孵育：将特异性一抗加入到膜上，与目标蛋白质结合。

5. 洗涤：用缓冲液洗涤膜上的非特异性结合物。



6. 二抗孵育：将与一抗结合的二抗加入到膜上，与一抗结合的蛋白质形成复合物。

7. 洗涤：用缓冲液洗涤膜上的非特异性结合物。

8. 信号检测：使用化学发光或染色等方法检测膜上的蛋白质复合物，得到目标蛋白质的信号。

9. 数据分析：根据信号的强度和大小，分析目标蛋白质的表达量和分子量等信息。

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