PCR技术

青草

PCR技术基本原理
PCR是一种选择性体外快速扩增DNA片段的方法。在体外以类似于细胞内DNA半保留复制过程，以拟扩增的模板DNA分子，与模板DNA互补的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4种dNTP及适合的缓冲体系组成的反应体系，经过重复地变性一退火一延伸三步，扩增新的目的DNA链，这个过程通过控制反应体系的温度来实现。
PCR包含下列三步反应:
1、变性(denaturation)
将反应体系混合物经加热至94℃左右，维持较短的时间，使双链DNA变成单链DNA，便于下一步引物的结合。
2、退火(annealing)
将反应体系温度下降到特定温度(一般是引物的Tm值以下)，引物与DNA模板以碱基互补的方式结合，形成模板-引物杂交双链。退火温度是保证引物与DNA模板互补结合的关键。由于引物结构简单，加之引物量远远大于模板DNA的数量，所以DNA模板单链之间的互补结合很少。
3、延伸(elongation)
将反应体系的温度上升到72℃左右并维持一段时间，在Taq DNA聚合酶的作用下，以引物为起始点，以4种单核苷酸(dNTP)为底物，从5'→3'方向延伸反应，合成新的DNA双链。以上三步反应为一个循环，重复进行变性、退火、延伸这三步反应，如此反复循环可以使DNA以指数形式进行扩增，从而使所需的目的DNA片段扩增放大百万倍。

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