PLT检测-Sysmex血球仪三种不同检测方法

奋斗的小鸟

摘自：PLT检测方法介绍-希森美康 (sysmex.com.cn)
电阻抗法（PLT-I）、光学法（PLT-O、PLT-F）
1、电阻抗法（PLT-I）
红细胞数&血小板数：RBC检测部，采用鞘流DC检测方法进行测定。
1）试剂：CELLPACK DCL：有效成分：NaCl 0.7%；Tris缓冲液 0.2%；EDTA-K2 0.02%
全血稀释液：用于测定红细胞&血小板的数目和大小的试剂，使用流体聚焦法（DC检测）测定。
2）原理：当不同于电解质的检测颗粒通过检测小孔时，会形成脉冲，脉冲振幅越高，体积越大，脉冲数量越多，检测颗粒数量越多（仅根据颗粒大小来区分血小板）。
优点：计数粒子较多，重复性好。
缺点：1、小红细胞、碎片会导致计数结果假性增高。
          2、大血小板，微小血小板，聚集会导致假性减低。




通过计算图中绿色虚线内部分，分别计算血小板数和红细胞数，正常情况下，红细胞体积明显大于PLT，两者是不会相互干扰。
当直方图存在异常时，如PLT尾部太高等，就会干扰plt的计数。所以电阻抗法是无法排除小红细胞，细胞碎片，巨大血小板，血小板聚集等带来的干扰，目前技术的鞘流，浮动界标，拟合曲线等都只能一定程度的降低干扰，还是无法真正排除，因此碰到直方图异常时点阻很多抗法血小板计数是不可信的。
2、光学法（PLT-O）
CELLPACK DFL全血稀释液（低值PLT检测专用）（麦黄酮缓冲液0.17%）用于与Fluorocell RET配合来测定Ret，使用半导体激光，通过流式细胞计数法来测定。
原理：通过核酸荧光染色法（荧光强度区分红细胞），激光散射（前向散射光区分大小）多维度分析。
在RET通道， 使用荧光染料将未成熟红细胞中的大量残存核酸染色，用流式细胞术的原理进行检测。
被荧光染色的网织红细胞根据荧光强度的强弱分类为四部分：HFR（高荧光强度网织红细胞比率）、MFR（中荧光强度网织红细胞比率）、LFR（低荧光强度网织红细胞比率）、RBC（红细胞）。
分类为HFR、MFR、LFR的红细胞称为网织红细胞，特别是分类为HFR、MFR的网织红细胞作为IRF（未成熟网织红细胞指数）计数。另外，分类为RBC的红细胞作为成熟红细胞计数。





PLT-O散点图

PLT-O：通过对网织红核酸成分的染色的过程中，也对血小板进行染色。
优点：可以有效去除小红细胞、红细胞碎片干扰。
缺点：1，颗粒计数比不上PLT-I，精密度比不上PLT-I；
          2，白细胞碎片会导致PLT-O结果假性增高。
3、光学法（PLT-F）
CELLPACK DFL与Fluorocell PLT结合使用用于半导体激光流式细胞术进行血小板分析的试剂。
Sysmex XN系列血液分析系统的低值血小板检测通道（PLT-F）采用了流式检测的原理，使用特殊的荧光染料特异性地与血小板中线粒体的DNA（MtDNA）及小胞体的RNA（核糖体RNA）进行结合。
染色后形成不同的前向散射光和侧向荧光强度，通过检测散射光和荧光，从而能准确测定出准确的血小板数值。





PLT-F散点图

PLT-F可以排除大血小板、微小血小板、细胞碎片及小红细胞对血小板计数的影响，可以得到准确的PLT结果，尤其是在有重要临床意义的低值范围，给临床提供了准确的血小板计数。
PLT-F：单独PLT-F通道，专门对血小板进行染色，而且对血小板进行5倍颗粒分析技术。
优点：1，选择性染色血小板，故网织红细胞难以染色，避免红细胞碎片影响，特异性强；
          2，5倍颗粒分析计数，提高检测结果精密度，使低值血小板更精确；
          3，可以有效排除微血小板的干扰；
          4，高灵敏度地检出血小板凝集。

PLT-F与PLT-O的主要区别：
1、荧光染料的改变，PLT-F的荧光染料以噁嗪为主，可以有效去除细胞碎片、小红细胞的干扰；
2、计算分析方式的改变，避免样本中存在的微小血小板的漏检；
3、分析量的增加，提高低值检测的精密度。

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