如何保证高质量的DNA和RNA

笑看风云

从生物样本获得的核酸质量取决于多个因素：(a) 原始样品的质量（处理）；(b)提取质量和所用方法；(c) 保存条件。最近一次审查更详细地解决了DNA质量保存问题。

细胞完整性的破坏和细胞内区室膜的断裂发布了大量降解酶，造成核酸损坏或者大量降解。细胞凋亡是导致核酸降解的受控细胞分解过程。因此，为了取得最好结果，原样需要小心地按照确保细胞保持完好无损的条件进行处理。一个重要观察是，如果用干血斑来获得模板DNA，全血含有PCR反应抑制剂。通过对样本采集采取隔夜甲醇固定步骤或者使用预处理卡，使这些抑制剂失活。

高质量RNA比DNA更难获得，大多数情况是因为不稳定的原因。RNA能够在全血进行Ficoll®梯度分离之后从分离淋巴细胞中有效提取。这个方法更具成本效益性，比直接从整个血样隔离能够产生更多的RNA。

RNA和DNA纯化试剂盒可买到，使用简便，包括所有必要的缓冲液和详细说明。Qiagen®和 Gentra®试剂盒是最广泛使用的试剂盒。酚/氯仿提取的原始方法仍然是DNA生成的最有效率方法之一，如不同方法DNA产出的研究中所示。在开始研究之前，可能有必要比较不同DNA提取方法的相对效率、DNA产出质量，以及与研究目的的可比性。重要的是，从口腔细胞中分离的大部分DNA都不是人体DNA，只有11–49%实际上是人体DNA。因此，必须使用人体特定顺序对DNA产量进行量化。

最后，如果不在正确的条件下操作的话，长期保存（数年）可能影响到核酸的完整性。DNA和RNA必须保存在−80℃下，虽然−20℃可能短期（数月）内对DNA适当。有必要做多个等份，以避免反复冻融，防止整个样本因交叉污染而丢失。重要的是这里要注意到必须避免使用无霜冰柜，因为这种冰柜会使少量等份样本干燥，即使放在带盖离心管内也会干燥。

黄先生

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