Western blot从原理、步骤到常见问题，包教包会

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Western Blot 概述，WB是什么？
Western Blot（蛋白免疫印迹）：将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
为什么要做WB？WB的实验目的？
目的1：研究一些体外的蛋白质分子，寻找目的蛋白是否存在
目的2：研究目的蛋白质的表达情况（上调或者下调；在不同样品中的表达差异性）
WB实验原理


做WB主要是为了对蛋白表达定性或粗定量；定性就是看处理后相对未处理而言，某个蛋白表达了；粗定量是看某个蛋白表达量显著升高，在实验中的体现就是条带变粗了；做WB检测蛋白主要分为两种，一种是检测已知蛋白，另一种是检测未知蛋白；对于已知蛋白而言，我们知道要检测的是什么东西就可以根据目的蛋白选择相对应的一抗，一抗可以跟目的蛋白特异性结合，然后我们会在体系中引入二抗，二抗是带有供我们检测的标签的，二抗跟一抗结合后就可以顺着标记通路连接到目的蛋白上，这样呢，我们就可以通过标签去检测目的蛋白的存在了；对于未知蛋白呢，其实也是类似的，我们不知道要检测的是什么蛋白，就在目的蛋白前面加一个标签，选择特异性结合的一抗，二抗与一抗特异性结合，整个通路原理都与刚才讲的已知蛋白是一样的。
WB试验步骤


WB如何选内参？内参的选择


膜的选择


封闭原理


显色发光常见方法


常见问题
WB背景高怎么排查？


WB有拖带怎么办？


WB跑的条带总是有杂带，怎么排查？



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