PCR实验报告

莺歌燕舞

来源：知乎
实验二：PCR
实验目的
1、了解PCR技术，掌握最基础的PCR实验步骤
实验原理
1、PCR全称聚合酶链反应，是体外快速扩增特定基因或DNA序列最常用的方法。
2、基本原理：首先将双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成2条单链DNA分子，DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸合成新的DNA互补链。PCR反应时，只要在试管内加入模板DNA、PCR引物、四种核苷酸及适当浓度的Mg2+，DNA聚合酶就能在数小时内将目标序列扩增100万倍以上。
实验内容
PCR MIX 5ul
F 上游引物  1ul
R 下游引物 1ul
模板  DNA 1ul
H20  2ul
共  10ul
实验结果



注意事项
1、戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套。
2、使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染。
3、避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
4、操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度。
5、最后加入反应模板，加入后盖紧反应管。
6、操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性。
7、尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器，至少PCR操作过程中加样器应该专用，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区。
8、重复实验，验证结果，慎下结论。

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/529308437