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[分享] Western blot | 条带问题千千万,旧的不去新的又来

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发表于 2024-7-26 10:38 | 显示全部楼层 |阅读模式

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蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现己广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

蛋白实验虽然简单,但是条带容易出现的问题极多,下面来分享一下不同条带的原因和解决办法吧。

出现不均匀的白色斑点的原因


  • 转膜时有气泡
  • 膜上抗体分布不均匀

解决办法
  • 转膜前小心去除气泡
  • 抗体孵育时保持摇动


条带的“微笑”效应的原因
  • 迁移过快
  • 电泳时温度过高

解决办法
  • 优化电泳条件
  • 降低电泳温度,在冰上操作


条带分布不均匀的原因
  • 可能和抗体有关
  • 可能孵育时振荡不均匀
  • 抗体和封闭液不结合

解决办法
  • 更换二抗
  • 确保孵育过程中膜完全浸没在抗体中,孵育时确保摇晃均匀
  • 尝试更换封闭液


条带问题千千万,以上内容只涉及小部分原因和解决办法,还有很多其他因素。总之,有时候步骤正确可能是操作手法的问题,建议大家做实验的时候严谨一点哦。

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