【焕新首发 性能强悍】VD发光大包装试剂V2.0版——灵敏度与线性兼具

Okay欧凯

为满足客户需求，打造高品质试剂，结合市场调研和用户反馈意见，南京欧凯生物对25-OH-VD发光大包装试剂（Q80h1）的核心原料及试剂性能进行了全方位的优化。升级版Q80h1试剂检测灵敏度与线性兼具；在降低非特异性背景噪音的同时，大幅提高信号强度。与初代试剂相比，整体信噪比提升约45倍。

1. 超强信噪比

Q80h1采用新一代小分子夹心检测技术，其检测灵敏度和特异性都显著优于竞争法，但在线性和背景噪音方面却仍有优化空间。为此，我们对Q80h1的核心原料进行了升级，升级后的背景噪音有效降低，信号增益幅度更大，区分度也更高。低端信噪比提升了15倍，高端信噪比提升了近45倍。

校准品 浓度 （ng/mL） RLU S1 0.00 195 S2 1.15 12217 S3 3.44 26591 S4 15.71 208683 S5 31.91 842490 S6 70.33 2731118 S7 153.86 6567286 S2/S1 62.65 S6/S1 14005.73	校准品 浓度 （ng/mL） RLU S1 0.00 14776 S2 0.22 19850 S3 1.08 55912 S4 10.27 534999 S5 45.02 2464797 S6 75.15 4585520 S3/S1 3.78 S6/S1 310.34
表1.25-OH-VD信噪比（升级后）	表2.25-OH-VD信噪比（升级前）

2. 比标质谱金标准

用Q80h1检测106例质谱赋值样本（浓度范围7.69~57ng/mL），样本符合率（R2）可达0.9645。

编号 质谱检测浓度 （ng/mL)） 自测浓度 （ng/mL） 1 7.69 6.89 2 8.35 9.8 3 8.94 10.21 ︙ ︙ ︙ 105 49.08 54.77 106 57 54.38
表3.VD临床对比分析数据（质谱赋值）	图1.VD临床对比分析（质谱赋值）

3. 检测VD2高浓度样本同样精准

临床研究显示：市售五大主流品牌（雅培、DiaSorin、IDS、罗氏、西门子）的25-OH-VD检测试剂与LC-MS/MS检测结果临床判定一致率不到71%。当样本中含有25-OH-VD2时，与LC-MS/MS检测结果的相关性更低。

为验证Q80h1对含有高浓度25-OH-VD2样本的检测能力，我们选取了11例25-OH-VD2含量明显高于25-OH-VD3的VD质谱赋值样本。用Q80h1和一款市售主流竞争法VD试剂同时对这些样本进行检测。结果显示：Q80h1的检测结果与质谱符合率依然很高（R2=0.939），而竞争法检测结果与Q80h1、质谱均存在明显偏差。

编 号	质谱检测浓度（ng/mL)）			欧凯 检测浓度 （ng/mL）	竞争法 检测浓度 （ng/mL）
	25-OH-VD2	25-OH-VD3	总25-OH-VD
1	10.42	6.43	16.85	17.63	46.7
2	13.12	4.68	17.80	21.3	53.2
3	12.9	7.64	20.54	22.98	31.8
4	16.7	10.6	27.3	28.88	41.2
5	21.37	8.8	30.16	31.06	21.4
6	24.53	10.17	34.7	35.94	17.1
7	19	15.9	34.9	41.18	24.9
8	24.14	15.88	40.02	38.44	61.8
9	32.8	7.8	40.6	38.32	84.3
10	29.2	12.42	41.62	40.3	54.8
11	25.26	16.4	41.66	42.65	31.2

表4.VD临床对比分析数据（质谱赋值VD2高浓度样本）

产品数据

化学发光平台（AE）

1. 总25-OH-VD识别能力

25-OH-VD抗体对25-OH-VD2的识别能力直接影响总25-OH-VD检测结果的准确性。经验证欧凯25-OH-VD发光大包装试剂（Q80h1）与25-OH-VD2、25-OH-VD3有很好的反应性，可有效识别样本中的总25-OH-VD。

浓度 （ng/mL） RLU 25-OH-VD2 25-OH-V3 0.00 201 213 5.03 33900 21043 15.16 228481 155393 35.43 951458 780271 70.12 2720547 2188499 150.73 6429867 5647803
表5.总25-OH-VD识别能力数据	图2.总25-OH-VD识别能力

1. 最低检测限

用Q80h1对零浓度稀释液重复测定20次，计算最低检测限。

名称	浓度（ng/mL）	RLU平均值	线性方程
校准品S1	0.00	195	y=10454x+195
校准品S2	1.15	12217
零浓度稀释液20次重复测定RLU值
213	231	198	245
205	241	193	265
230	205	249	232
232	232	208	322
225	216	230	316
RLU均值		234
SD		34.1
平均值+2SD		303
最低检测限（ng/mL）		0.010

表6.VD发光大包装试剂最低检测限

2. 线性

将浓度为148ng/mL的质谱赋值高浓度样本用样本稀释液稀释为50%、20%、10%、5%和1%五个浓度。用Q80h1对高浓度样本及五个稀释样本进行检测，计算相关性。

百分比	浓度（ng/mL）	RLU	绝对偏差	相对偏差
100%	148	6399087	/	0.60%
50%	71.3	2961553	/	-3.10%
20%	30.9	754539	/	4.70%
10%	14.2	190843	-0.62	/
5%	8.30	60302	0.83	/
1%	1.41	15120	-0.18	/
相关性：0.99971

表7.VD发光大包装试剂线性

3. 重复性

利用同一批Q80h1对浓度为10.26ng/mL和50.31ng/mL的质谱赋值样本各重复检测10次，其测量浓度变异系数（CV）均小于3%。

低值样本 测定值编号 RLU 浓度（ng/mL） 1 97500 10.32 2 96880 10.28 3 94734 10.14 4 97811 10.34 5 93522 10.06 6 94886 10.15 7 104663 10.77 8 97966 10.35 9 95344 10.18 10 107463 10.94 平均值 / 10.35 标准差 / 0.28 CV 2.7%	高值样本 测定值编号 RLU 浓度（ng/mL） 1 1731067 50.24 2 1810231 51.83 3 1752956 50.68 4 1713169 49.88 5 1785816 51.34 6 1738030 50.38 7 1741512 50.45 8 1762412 50.87 9 1726412 50.14 10 1726094 50.31 平均值 / 50.61 标准差 / 0.592 CV 1.17%
表8.VD发光大包装试剂重复性（低值）	表9.VD发光大包装试剂重复性（高值）

4. 准确度

将浓度为50.31ng/mL的质谱赋值高浓度样本，按照1：9的体积比加入到浓度为10.15ng/mL的低浓度血清中，配制成浓度为14.17ng/mL的混合物，用Q80h1进行检测，计算回收率。

待测物	测定浓度（ng/mL）	RLU	浓度平均值（ng/mL）
高浓度样本	50.35	1736538	50.42
	50.22	1730072
	50.68	1752956
低浓度血清	10.12	94430	10.22
	10.21	95803
	10.34	97811
混合物	14.16	170846	14.26
	14.32	174539
	14.29	173842
回收率	100.28%

表10.VD发光大包装试剂回收率

5. 热稳定性

将Q80h1试剂组份分别放置于37℃培养箱和4℃冰箱中加速7天，分别测试高、低值样本，比较其偏差。

低值样本 测定值 编号 RLU 浓度（ng/mL） 4℃7天 37℃7天 4℃7天 37℃7天 1 93071 84504 10.03 9.44 2 94886 85490 10.15 9.51 3 92921 85207 10.02 9.49 偏差 / -5.8%	高值样本 测定值 编号 RLU 浓度（ng/mL） 4℃7天 37℃7天 4℃7天 37℃7天 1 1736040 1635741 50.34 48.32 2 1725100 1637724 50.12 48.36 3 1738527 1632272 50.39 48.25 偏差 / -4.1%
表11.VD发光大包装试剂热稳定性（低值）	表12.VD发光大包装试剂热稳定性（高值）