实验达人必备：RT-PCR全攻略，从新手到专家的快速通道

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在细胞生物学的领域，RT-PCR（逆转录聚合酶链反应）是一项至关重要的技术， 简单来说就是我们从RNA模板中合成cDNA，并进一步分析基因表达。对于实验室新手来说，这项技术可能看起来有些复杂，但通过以下步骤，我们可以清晰的了解这个过程：
    在进行RT-PCR之前，我们需要设计拟分析基因的引物，如何设计呢？引物设计 Primer Premier5操作详细过程-干货分享 分分钟学会，设计好之后可以给供应商合成，一般隔天到，收到引物前您还可以看看这个引物稀释注意事项，求解！QPCR 干粉引物溶解稀释的最佳方案是什么？
    当引物设计好后，就可以开始正式实验了。注意除了目的基因的引物，还需要内参基因引物，例如β-Actin,GAPDH。
提取RNA：提取RNA,常用的如trizol法，也有试剂盒的可以按照试剂盒说明进行，也可以参考我们的方法，超级详细血清提取RNA-TRIZOL方法，Trizol 法提取RNA的技术路线，还有技巧轻松掌握 RNA 提取技巧---主打就怕你不会，不会的还可以看下视频演示血清提取RNA（最终版本+音乐）。提取到RNA后，需要进行RNA纯度检测，一般用微量分光光度计测定OD260/OD280的比值，介于1.9-2.0（或1.8-2.0）说明RNA纯度较高。
    逆转录：这一步的目的是将RNA逆转录成cDNA,荧光PCR前必做的逆转录：原因与原理大公开，具体操作一般按照逆转录试剂盒操作进行。
    qPCR通常采用两种方法进行基因表达的定量分析：SYBR Green染料法和TaqMan探针法。SYBR Green染料法通过荧光信号的变化来检测DNA的累积，而TaqMan探针法则通过特异性探针与目标序列的结合来实现定量。SYBR Green染料法比较常用，qPCR 加样要点，你知道多少？qPCR的内参基因有什么用？选好内参，加好样，现在一般会要求有3个技术性重复和3个生物学重复，qPCR 实战经验分享，让你少走弯路！放入qpcr仪中,设置好温控程序。
     结果分析：等待一两个小时后，就可以导出我们所需的Ct值进行分析了。如何判断qPCR数据能不能用？结果处理视频演示：你不知道的QPCR数据处理小秘密!，为什么QPCR结果跟测序结果不一致？问题出在哪里了？