细胞瞬时转染效果不佳？如何让你的实验成功率翻倍？

生物科研实验室

细胞瞬时转染是一种常用的实验技术，用于将外源DNA或RNA导入细胞内，以研究基因表达、功能和调控机制。以下是细胞瞬时转染的一般步骤和注意事项。
细胞培养：
1 提前一天铺板，并且确保细胞均匀分布，具体铺板技巧，请翻看之前文章，细胞铺板总是铺不均匀?别急，方法来了！转染前将细胞培养至70-80%的密度，以确保细胞处于活跃的生长状态。
2 转染试剂和质粒准备：
根据转染试剂的说明书准备转染试剂和质粒DNA。
转染试剂的用量通常根据细胞类型和转染效率来确定，一般为2-10 μL/孔（对于24孔板）。
质粒DNA的用量通常为0.1-1 μg/孔（对于24孔板），具体用量需根据实验目的和转染效率进行优化。
3 混合转染试剂和质粒：
在无菌条件下，将转染试剂和质粒DNA混合在无血清培养基中，质粒和转染试剂混合后需用枪轻轻混匀，轻轻混合后孵育5-30分钟，以形成转染复合物。
4 转染复合物添加到细胞：
将转染复合物添加到细胞培养孔中，轻轻摇动以确保均匀分布。
5 孵育：
将细胞培养板放回培养箱中，孵育一定时间（通常为24-48小时），以便DNA进入细胞并表达。
6 观察和分析：
根据实验目的，可以通过可荧光显微镜下通过荧光观察转染效率或提蛋白跑WB进行验证。
注意事项：
1 确保所有操作在无菌条件下进行，避免污染。
2 转染效率可能受到细胞类型、转染试剂、质粒DNA质量、转染条件等多种因素的影响，需要进行优化。
3 转染后细胞可能会受到一定的应激，注意观察细胞状态。
影响细胞转染的因素
（1）细胞密度
细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞密度会导至转染效率降低，乃至表达水平偏低。最好预实验摸索下条件再进行。

（2）细胞生长状态
传代次数太少或者太多，状态不好都将导至细胞对转染试剂敏感度的改变。

（3）质粒质量
用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无内毒素，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。

（4）培养基中的血清
在开始准备DNA和转染试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成.，也不可以有抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导至转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。