WB一张膜上多个抗体，要求整膜怎么办？

生物科研实验室

对于蛋白质印迹（Western Blot, WB）实验的图像要求越来越严格，许多期刊都要求提供完整的膜图像。对于需要检测多个蛋白质指标的实验，获取足够的样本进行重复实验确实是一项挑战。
一些小伙伴可能会尝试将膜裁剪拼接后，一起拼接后曝光，但是，这样有个问题，由于蛋白质的表达量和所用抗体的亲和力存在差异，这种方法很难保证所有蛋白条带都能在一次曝光中达到理想的显影效果。例如，可能会出现某个蛋白条带因过曝了，而另一个蛋白条带没有曝出来。
为了解决这个问题，建议这样解决：首先对每张膜先进行完整拍照，然后再裁剪后的条带重新拼接，以恢复到原始膜的布局。这样做可以清楚地展示所有条带均来源于同一张膜，排除了条带替换或篡改的可能性。最终，将完整的膜图像、裁剪后拼接的图像以及显影条带的原始图像一并作为补充材料提交。
还有个解决办法孵完第一个抗体后拍好照，然后用strip液洗过后，重新封闭再敷第二个一抗，最后merge在一起还是可以看出来是同一张膜的，建议内参放在最后孵育，原因就是那个洗脱液把之前的一抗二抗洗掉再重新敷，但是会对后面敷的蛋白有损失，所以先敷你最重要的那些目的蛋白。