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细胞培养是一项精细且技术性很强的工作,涉及到细胞的生长、繁殖、传代以及冻存等多个环节。每个环节都需要精心操作,以确保细胞的健康和实验的准确性。
1细胞培养基如何选择?
如果购买的细胞是买自ATCC或者其他的细胞库,直接问供应商或者查找相关文献;培养基的种类的话,基本上最常用的有四个--MEM、DMEM、1640、F-12。
2.培养基颜色为什么变红?
细胞培养基通常是无色透明的,但在某些情况下,它们可能会呈现红色或其他颜色。许多细胞培养基中添加了酚红(Phenol Red)作为pH指示剂。酚红在不同的pH值下会呈现不同的颜色,通常在pH 7.2左右时为红色。细胞代谢产生的CO2会降低培养基的pH值,导至酚红颜色变黄。
3 细胞生长缓慢怎么办?
细胞生长缓慢首先看细胞有没有污染,如果没有污染,生长很慢,可以提高血清比例试下。
4 细胞培养皿与细胞培养瓶的区别?
细胞培养皿:通常为扁平的圆形或方形容器,有多种尺寸,如6孔、12孔、24孔、96孔等,适合进行小规模的细胞培养或实验。操作比较方便,成本较低。
细胞培养瓶:通常是圆柱形的容器,容量较大,如25cm²、75cm²、150cm²等,适合培养更多的细胞或进行长期培养。安全系数更高,成本相对较高。
细胞培养状态上两者差不多,一般没有啥特殊要求,选择培养皿就可以。
5 细胞为什么可以贴壁生长?
贴壁细胞之所以会贴壁,是因为它们的生长和繁殖需要依赖于一个固体表面。贴壁细胞表面存在多种分子,包括糖蛋白、整合素等,这些分子能够与培养容器表面的特定成分结合。贴壁细胞之间通过细胞间连接(如紧密连接、桥粒等)相互作用,形成稳定的细胞层。通常,细胞培养容器的表面会经过特殊处理,比如涂覆一层蛋白质(如聚赖氨酸、纤连蛋白等),以增加细胞的附着能力。不同的细胞类型具有不同的贴附特性。例如,成纤维细胞和上皮细胞通常具有很强的贴附能力,而某些癌细胞或悬浮细胞则可能不那么容易贴附。
6 细胞冻存对细胞量的要求是多少?
细胞冻存对细胞量的要求通常较高,以确保在复苏时有足够的细胞存活。根据搜索结果,细胞冻存时,细胞密度应达到≥90%,并且在冻存管中细胞的起始浓度建议为106−107个/ml/管/ml/管。这意味着在进行冻存之前,细胞应该在培养皿或培养瓶中生长到接近或达到这个密度,以保证在冻存和复苏过程中有足够的细胞数量,减少因细胞死亡导至的损失。
此外,冻存液的配置也非常重要,通常包含基础培养基、血清和保护剂(如DMSO),比例可以根据细胞类型和实验习惯进行调整,但常见的配方是培养基:血清:DMSO = 7:2:1 或其他比例。高浓度的血清有助于维护细胞活力,提高复苏后的存活率。在冻存过程中,还应注意慢冻原则,避免细胞内形成冰晶,减少细胞损伤。 |
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