细胞培养中究竟要不要加抗生素？

生物科研实验室

提到细胞污染，大家想到较多的是细胞中的细菌、浑浊的培养基、培养瓶中的非法入侵者等。此外，病毒和化学污染对细胞培养物的健康也非常重要，确保细胞株不存在交叉污染也是获得可重复结果的关键因素。


细胞培养过程中的污染问题到底有多普遍？

FDA、ATCC及其他诸多研究表明，大约5-30%的细胞培养存在支原体污染；Merten的一项研究发现普通细胞株的病毒污染事件超过25%。
控制污染的关键是如何检测出污染。

细菌、真菌和酵母污染物通常是肉眼可见的，或许能迅速杀死细胞，但微妙的形态可能使重要的微生物入侵者像支原体一样难以被检测到。相比之下，传统光学显微镜无法检测到病毒，因此病毒污染通常是在观察到无法解释的分离、细胞健康较差的其他迹象或甚至是细胞死亡时才被发现的。


如何控制和预防细胞污染？

很多人会采用在细胞培养液添加抗生素的方法。但，这种做法是正确的吗？细胞培养中究竟要不要加抗生素？今天一起来看看几位科研老司机的建议：

@小太阳：
由于细菌和酵母等的污染很容易观察到，及时清理污染细胞可大大减少支原体、病毒的污染机会。潜在的支原体、病毒的感染会带来很大的危害。这些微生物的存在会影响细胞的理化性质，从而使研究者得到错误的实验结果。由于过滤技术的提高和超净台质量的改进，在规范细胞培养操作过程中引进污染的机会已经被大大减低。所以，建议常规的的细胞培养中不要使用抗生素。只有在培养污染源较多(如组织培养)或者非常珍贵的细胞株时才使用抗生素。

@大大的实验狗：
细菌的话最好排查污染源，抗生素不是好东西。如果一定要加的话，平时使用浓度是青霉素100U/mL，链霉素100μg/mL。如果是冲击治疗，可用10X（刚才配比为1X）。另外，实验室条件如果不好，可能引发真菌污染，可以尝试用两性霉素，具体浓度不记得了，因为这个毕竟用的少。

@月亮：
对付细菌和真菌的污染不应求助于抗生素，因为用久了我们知道它有一个选择效应，会产生抗药性的菌株。所以最好还是注意无菌操作，从源头上排除污染比较好。对付支原体污染，还是要用抗生素的，可以用环丙沙星，终浓度50μg/mL就可以，处理大约一周到两周再去掉环丙，我买回来的的两株细胞这样处理好了。

@冷风吹：
污染细胞最好还是丢弃，除非珍贵的细胞系可以用药救一救。我同时养七株不同的细胞都没发生污染……个人感觉还是操作问题。

@可可：
找到污染源并彻底清理是更好的处理方法，不要觉得可惜就老是想着要加抗生素挽救。肯定挽救不过来的，这次用庆大抑制住了，慢慢还是会筛选出抗性细菌的。能不加抗生素最好不要加，我平常养的细胞都不用抗生素，注意规范操作，极少会出问题的。

@马云是谁：
污染不是靠用抗生素能解决的，一点用都没，完全没必要加。只要细胞房卫生做的好，试剂都干净，操作注意，根本不会有污染......
最关键的是细胞房的管理要好,规定时间培养箱消毒，地面用酒精搽，房间里紫外线灯人走长明，一般就不会有污染了，这点我体会很深 ！管理非常非常重要。

@娜娜：
１、最常用：青霉素、链霉素联合抑制细菌，即所谓的“双抗”，主要针对革兰氏阳性菌、阴性菌；对于细菌的感染也可用庆大或卡那霉素；
２、如果真菌污染严重，可用两性霉素／制霉菌素控制；
３、若为支原体污染，可用庆大霉素／四环素／红霉素；


总结：
抗生素虽然减少了可以观察到的细菌、酵母等微生物的污染机会，却会增加支原体、病毒等隐性污染的机会。

因为细胞培养中污染主要来源于空气中的微粒和汽雾，而这些微粒和汽雾可以同时携带支原体、病毒和其他微生物。当抗生素使用时，可见污染被抑制而隐性污染又没被注意到，这样支原体、病毒等隐性污染的机会反而增加了。Barile的一项研究显示72%持续使用抗生素培养的细胞有支原体污染，而不使用抗生素培养的细胞支原体污染的比例只有7%。

反过来如果不使用抗生素，支原体、病毒的污染往往会伴随细菌和酵母等的污染。由于细菌和酵母等的污染很容易观察到，污染细胞的及时清理就大大减少了支原体、病毒的污染机会。

潜在的支原体、病毒的污染会带来很大的危害。这些微生物的存在会影响细胞的理化性质，从而使研究者得到错误的实验结果。在严重的情况下，甚至使一个实验室数年的研究白白浪费。

由于过滤技术的提高和超净台质量的改进，在规范的细胞培养操作过程中引进污染的机会已经被大大降低了。所以比较合理的建议是，在常规的细胞培养中不要使用抗生素。只有在培养污染源很多（比如组织培养），或者培养非常珍贵的细胞株时才使用抗生素。