【实验经验】动物细胞培养中的问题与分析

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动物细胞培养是生物学基础实验中的基础，养不好细胞，后续的实验都难以开展。而细胞培养中也时常会有各种状况发生，例如细胞生长缓慢、细胞不贴壁等，那么它们可能的原因都有什么呢？让我们一起了解下吧！

Q

细胞生长缓慢

可能原因：

• 培养液及培养方法有误；更换不同培养液或血清也可能导至生长缓慢。
• 培养液中一些细胞生长必须成分如生长因子耗尽或缺乏。
• 培养物中有少量细菌或真菌污染；
• 接种细胞起始浓度太低；
• 细胞老化；
• 支原体污染。
  
  

解决方法

• 检查培养液和培养方法是否正确，比较新培养液与原培养液成分，让细胞逐渐适应新培养液；
• 换入新鲜配置培养液，或补加生长因子；
• 用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；
• 增加接种细胞起始浓度；
• 换用新的保种细胞；
• 分离培养物，检测支原体，如发现支原体污染，丢弃培养物。
  
  

Q

细胞不贴壁生长

可能原因：

• 支原体污染。
• 培养瓶瓶底不干bai净。
• 培养液pH 值过碱（NaHCO3 分解）。
• 消化du液或培养液配制错误、过期储存、储存不当。
• 细胞老化（如传代前细胞已汇合导至失去贴附性）。
• 接种细胞起始浓度太低或太高。
  
  

解决方法：

• 缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度.
• 分离培养物,检测支原体.清洁支架和培养箱.如发现支原体污染,丢弃培养物.
• 注意刷洗,或换用一次性塑料培养瓶.
• 使用无菌醋酸溶液调整pH 值或充入无菌CO2（将培养液敞口放入培养箱也可）.
• 重新配置消化液或培养液.
• 启用新的保种细胞.
• 调节最佳接种细胞浓度.
  
  

Q

培养细胞死亡

可能原因：

• 培养箱内无CO2；
• 培养箱内温度波动太大；
• 细胞冻存或复苏过程中损伤；
• 培养液渗透压不正确；
• 培养液中有毒代谢产物堆积。
  
  

解决方法：

• 检测培养箱内CO2；
  
• 检查培养箱内温度；
• 取新的保存细胞种；
• 检测培养液渗透压；
• 换入新鲜培养液。