1分钟速读：常见WB样本制备技巧

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• 细胞蛋白质提取：
  
  • 选取长势良好的细胞，弃上清，加入适量 PBS 洗两次，加入胰酶消化几分钟；加入少量培养基终止消化，将细胞悬液转至离心管中离心。
  • 弃上清，加入适量 PBS 重悬细胞后转至 Ep 管中，离心，弃上清，反复两次使细胞中大部分杂质去除。
  • 若提取细胞量约50万个左右，可加入200ul 高效 PIRA 裂解液+2ul PMSF，振荡混匀，置于冰上裂解30min；期间需将 Ep 管振荡混匀至少约3次。
  • 4°预冷离心机，将 Ep 管14000rpm 离心10min。
  • 小心吸取上清于新 Ep 管/吸取上清并分装于微量离心管中，即为所提取的蛋白，弃沉淀。蛋白可储存于-80°。
    
• 组织蛋白提取：
  
  • 取5~20mg 组织，PBS清洗干净，液氮研磨/无菌培养皿中剁碎，转入 Ep 管中。
  • 加入200ul 高效 PIRA 裂解液+2ul PMSF，振荡混匀，置于冰上裂解30min；期间 Ep 管需振荡混匀至少3次。
  • 4°预冷离心机，Ep 管14000rpm 离心10min。
  • 小心吸取上清于新 Ep 管/分装于微量离心管中，即为所提取蛋白，储存于-80°。