ELISA成功与否在此一举

虾米

ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学分析技术，可用于判断受检标本中是否含有待检测抗原或抗体，是免疫反应的定性和定量检测方法，也是许多科研人员的日常实验之一。这么重要的实验，每个步骤可都不能疏忽，其中最最最关键的一步，也是整个实验的最后一步，便是我们今天要介绍的——酶标仪的分析。

酶标仪

酶标仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器，它又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动两大类，但其工作原理基本上都是一致的,即用比色法来进行分析。测定一般要求测试液的最终体积在250 μL以下。

原理

酶标仪的主要操作是使用光电比色计或分光光度计，测量光通过测试样品前后的能量差。测试物质吸收引起的光能差通常与测试物质的浓度线性相关。

酶标仪的波长范围通常为400 nm至750 nm，并受滤光片或衍射光栅（纳米）限制。光学系统中通过光纤为含有样品的微孔板孔提供光。穿过样品的光束直径范围为1至3毫米，样品发出的光由检测装置检测，检测装置放大信号并计算样品的吸光度。

分类

根据酶标仪的工作原理，我们可以将其进行分类。

颜色反应型酶标仪

通过酶催化底物的颜色反应来测量样品中的酶活性或待测物的浓度。

荧光反应型酶标仪

通过酶催化底物的荧光反应来测量样品中的酶活性或待测物的浓度。

ELISA酶标仪

专门用于执行ELISA，用于检测抗体或抗原的存在和浓度。

发光反应型酶标仪

通过酶催化底物的发光反应来测量样品中的酶活性或待测物的浓度。

使用方法

01

准备工作

a.确保酶标仪和所需的微孔板、试剂等干净，并进行校准和预热。

b.准备好所需的样品和试剂，并对其进行适当的稀释或预处理。

02

设置酶标仪

a.打开酶标仪，进行初始化设置。

b.设置所需的波长或滤光片，选择适当的检测光源和检测范围。

03

准备样品和试剂

a.准备样品和控制组，并将其分配到微孔板中的相应孔位。

b.添加适当的试剂，如底物、底物溶剂、酶标记试剂等。

04

测量

a.将装有样品和试剂的微孔板放入酶标仪的样品架中，并确保对齐。

b.选择所需的测量时间和测量模式（吸光度、荧光或发光）。

c.启动测量程序，等待测量完成。

05

数据分析

a.使用酶标仪提供的软件或其他数据处理工具进行数据分析。

b.对于吸光度测量，选择适当的标准曲线，将吸光度值转换为待测物的浓度。

c.对于荧光或发光测量，选择适当的标准曲线，将测量值与标准曲线进行比较或计算。

注意事项

酶标仪的功能是用来读取ELISA试剂盒的反应结果，因此要得到准确结果，试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果，操作过程随意性较大，在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯，会造成较大误差。下面是一些使用酶标仪时需要注意的地方：

• 使用加液器加液，加液头不能混用。
  
  
• 洗板要洗干净。如果条件允许，使用洗板机洗板，避免交叉污染。
  
  
• 在测量过程中，请勿碰酶标板，以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。
  
  
• 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成后请洗手。
  
  
• 如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害，请严格按照试剂盒的操作说明，以防对操作人员造成损害。
  
  
• 如果仪器接触过污染性或传染性物品，请进行清洗和消毒。
  
  
• 不要在测量过程中关闭电源。
  
  
• 对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。
  
  
• 使用后盖好防尘罩。
  
  
• 出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。