实验成功的关键-PVDF膜的使用技巧

生物科研实验室

PVDF膜使用时要用甲醇浸泡？
PVDF本质是一种疏水性的聚合物，在水溶液中不会浸湿。为了在水性缓冲液使用PVDF膜，首先必须将其浸泡在50%醇溶液中。甲醇、乙醇和异丙醇都适合浸泡这种膜。之后必须用水反复冲洗以去除醇类，经预处理的膜现在可以直接放入转印缓冲液中平衡。



PVDF膜浸泡步骤？
湿转：

(1) 将膜在甲醇中浸泡30秒。膜应均匀的从不透明变成半透明。

(2) 小心的将膜放入双蒸水中，浸泡2分钟。

(3) 小心的将膜放入转印缓冲液中，至少平衡5分钟。



半干转：

第一步甲醇浸泡只需15秒，其他步骤同上。



PVDF膜的孔径怎么选？
一旦膜被浸湿，蛋白结合可通过蛋白与膜的接触而实现。由于蛋白与膜的结合贯穿整个膜的厚度，结合能力是由孔的内部表面积来决定的。0.2um PVDF膜内部表面积大约是0.45um PVDF 膜的三倍，使其吸附能力更高。可以看出，20KD以下蛋白选用0.2um PVDF膜, 20KD以上蛋白选用0.45um PVDF膜。
怎样确定PVDF膜是否转成功？
可以采用染色法来确定转膜是否成功，PVDF膜染料分2类，可逆染料在评估印迹之后可被从膜上洗掉。不干扰后续的免疫检测或印迹上蛋白的其它分析。最常用的可逆蛋白染料是丽春红。可逆染料主要缺点在于它们的灵敏度不及不可逆染料。由于印迹上高丰度蛋白的染色模式通常也能很好地提示低丰度蛋白在多大程度上转移，可逆染料灵敏度不高的缺点在大部分情况下并不影响使用。

不可逆染料通常表现出最佳的灵敏度，但会干扰蛋白的进一步分析。不可逆染料有氨基黑和考马斯亮蓝等。
PVDF膜丽春红染色步骤？
设备和溶液：

(1) 染料：0.2%丽春红、1%乙酸。按1:10用1%（v/v）乙酸稀释储液（20%染料，溶于30%（w/v）三氯乙酸和30%（w/v）磺基水杨酸）而制备；

(2) 甲醇，100%；

(3) 0.1 N NaOH；

(4) 双蒸水；

(5) 能容纳印迹膜的浅托盘。



染色步骤：

(1) 如果印迹膜是干燥的应先在100%甲醇中浸湿;

(2) 在托盘中加入足量的染料以覆盖印迹膜;

(3) 将印迹膜放入染料中，摇动1分钟;

(4) 取出印迹膜，用双蒸水彻底冲洗，直至达到所需的对比度;

(5) 若要彻底去除染料，用0.1 N NaOH清洗印迹膜。



如何剥离PVDF膜上的抗体？
印迹膜若要重复使用，应在第一次使用后立即进行剥离。如果不能立即剥离，将膜包在保鲜膜中，保存在PBS中，置于4°C。切勿干燥保存印迹膜。使用化学发光法曝光的膜可以用加热和去污剂组合来剥离PVDF膜上的抗体。
WB曝光后PVDF膜如何保存？
PVDF是一种化学耐受性好的聚合物，有着出色的长期稳定性。建议低温保存，室温对一些蛋白来说也是可以的。



步骤：

(1) 将干燥的印迹膜放在两张干净的滤纸中间。

(2) 将印迹膜-滤纸三明治放在两张卡纸之间。

(3) 用回形针夹住边缘。回形针不要压住印迹膜。

(4) 将它们放入可密封的塑料袋中。

(5) 将印迹膜保存在所需的温度：

    4°C 最多2周；

    -20°C 最多2个月；

    -70°C 长期保存。


PVDF膜和硝酸纤维素（NC）膜都是干啥用的？有啥不一样？选哪个膜更好？以下先从两种膜的一些性能，成本和应用上等几方面总结一下：
物理性能：
PVDF膜具有较高的拉伸强度和断裂伸长率，而硝酸纤维素膜的拉伸强度和断裂伸长率较低。
PVDF膜较为柔软，易于切割和折叠，而硝酸纤维素膜较为脆性，不易加工。
化学稳定性：
PVDF膜具有较好的耐化学性，对酸碱性物质和一些溶剂具有较好的稳定性，而硝酸纤维素膜则对酸碱性物质和有机溶剂比较敏感。
PVDF膜具有较好的耐候性，能够在室外环境中长时间保持稳定性，而硝酸纤维素膜在阳光和湿度条件下容易分解。
温度耐受性：
PVDF膜能够在较高温度下保持稳定性，通常适用温度范围为-10℃至150℃，而硝酸纤维素膜的温度范围较窄，一般为-10℃至40℃之间。
透明度：
PVDF膜具有较高的透明度，能够允许光线透过，可用于一些光学应用，而硝酸纤维素膜较为乳白色，透明度较低。
成本：
硝酸纤维素膜的生产成本相对较低，适用于大规模应用和低成本需求，而PVDF膜的成本较高。
应用领域：
PVDF膜常用于气体分离、液体过滤、电池材料等领域，而硝酸纤维素膜常用于生物医学、食品包装等领域。