基质胶不会用？Q&A一文速览

无锡耐思NEST

GelNest™基质胶是由小鼠肿瘤组织中提取的基底膜成分制备而成，包含的主要成分有层粘连蛋白、IV型胶原蛋白硫酸肝素糖蛋白等。这些成分可以提供细胞黏附、分化和增殖所需的支持和信号，同时也可以模拟生理环境中基底膜的特性，提高细胞培养的成功率和效果。
除了基底膜成分，GelNest™基质胶中还富含多种生长因子。这些生长因子可以促进细胞分化、增殖和迁移，从而进一步模拟生理环境中的细胞信号通路和互动。GelNest™基质胶具有广泛的应用前景，特别是在组织工程、细胞培养和研究等方面，可被用于类器官培养、干细胞分化、血管生成、迁移或侵袭和体内肿瘤发生等研究。

1.GelNestTM高浓度基质胶用于哪些实验？
GelNestTM高浓度基质胶可适用于体内应用研究，如高浓度蛋白可促进肿瘤生长。高蛋白浓度同时可使GelNestTM基质胶注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的肿瘤细胞和/或血管生成因子的原位保持，便于用于原位分析和/或以后的切除。

2.如何将GelNestTM基质胶用于3D培养？怎样制作3D胶？需要将细胞嵌入到GelNestTM基质胶中吗？
GelNestTM高浓度基质胶可适用于体内应用研究，如制备厚层包被用于3D细胞培养。细胞可以嵌在GelNestTM基质胶中或者接种在GelNestTM基质胶表面（覆盖法）。

3.使用GelNestTM基质胶时，需要将移液器吸头和离心管预冷吗？
是的。因为GelNestTM基质胶在高于10℃的条件下即会开始成胶，我们推荐操作基质胶时使用预冷的移液管、吸头和离心管。

4.GelNestTM基质胶会快速聚合吗？
GelNestTM基质胶在10℃至35℃时会快速聚合成胶。

5.什么情况下，需要使用无酚红GelNestTM基质胶？
对于涉及颜色检测的实验，推荐使用无酚红GelNestTM基质胶，如使用荧光染料或Drabkins法计数内皮细胞成管实验。对于子宫内膜细胞培养，也需使用无酚红GelNestTM基质胶。
此外，酚红和非甾体雌激素结构类似，有类雌激素效应。在实验动物体内可能具有干扰内分泌和荷尔蒙代谢的能力。

6.如何从GelNestTM基质胶中收获细胞？
推荐使用中性蛋白酶或细胞回收解决方案来收获培养在GelNestTM基质胶中的细胞。中性蛋白酶相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液，不会损伤细胞或细胞表面蛋白。对于需要继续接种培养或进行检测的细胞，使用中性蛋白酶不会产生损伤。此外中性蛋白酶也可以用于组织分离。
对于代谢研究和RNA抽提，建议在4℃使用细胞回收解决方案进行非酶反应的细胞收集。因为GelNestTM基质胶中含有痕量的RNA，进行RNA分析时，应设一个GelNestTM基质胶（不接种细胞）的对照组。其它从GelNestTM基质胶中收获细胞的方法：降低温度至4℃-6℃使GelNestTM基质胶解聚，需要一定的时间并且仅适合一部分应用。

7.GelNestTM基质胶包被过的培养皿可以储存多长时间呢？
包被过的培养皿最好当天使用，具体情况取决于实验目的。需要保存的情况下，可在37°C培养箱中最多存放7天。保存时GelNestTM基质胶表面需要使用无血清培养基均匀覆盖，保持湿润。

8.哪些情况下应该选用薄胶？什么时候用厚胶呢？3D培养有哪些应用？
薄胶主要用于辅助细胞贴壁，有利于细胞增殖。如原代细胞培养，需要一层薄薄的蛋白层辅助，就可以选用薄胶；厚胶主要用于3D细胞培养，如大鼠主动脉组织分化为毛细血管样结构（RingAssay），以及进行细胞侵袭实验等；3D细胞培养实验，主要是用于研究细胞与细胞间的相互作用以及复杂结构，如生物组织等。

9.进行内皮管形成实验，应该选用多大浓度的GelNestTM基质胶呢？
进行该实验，GelNestTM基质胶最低浓度应不低于10mg/mL。

10.GelNestTM基质胶的最低成胶浓度是多少？
不同的实验目的需要不同的GelNestTM基质胶浓度，用户应该根据具体的实验需求确定。GelNestTM基质胶最低成胶浓度为7mg/mL。稀释时不要简单进行体积倍比稀释，不同批次间的GelNestTM基质胶浓度有差异，应该根据最终工作浓度(mg/mL)算出需要加入的稀释液体（如PBS或无血清培养基）的量。用于体内研究的GelNestTM基质胶，为了避免成胶不完全，最终工作浓度不应低于10mg/mL。

11.GelNestTM基质胶胶块在体内可以维持多长时间？
基质胶胶块可以在体内维持至少一周的时间。

12.怎样稀释GelNestTM基质胶?
使用冰上预冷的无血清培养基或者PH7.4的PBS。

13.应该如何对GelNestTM基质胶移液操作?
推荐使用预冷的移液器或者注射器操作，移液管、枪头同样需要预冷。吸液时不要触及瓶子底部；分液时切忌过快、用力过猛。如果使用移液管（Pipets），需要分液5mL时，应该吸取6mL，分液到移液管内仍有1mL时即停止；如果使用自动移液器（Pipetman），按压到第二档位吸液，然后按压到第一档位进行分液。

14.为什么我的GelNestTM基质胶很粘稠？
基质胶的蛋白浓度越高，胶体越粘稠。如果浓度高于13.0mg/mL，基质胶会显得非常厚重。GelNestTM基质胶基质胶产品在未稀释前都会比较粘稠。粘稠的高浓度GelNestTM基质胶不稀释也可以直接使用，如用于培养肿瘤细胞和/或血管生成因子，注射于小鼠体内后，细胞可以保持原位，便于原位分析和/或以后的切除；或者稀释后，按照标准浓度的GelNestTM基质胶产品使用方法使用，具体稀释浓度根据实验需求确定。
除因为产品本身浓度高而粘稠外，基质胶的状态还与运输过程中温度的变化和储藏条件有关。整个运输过程中必须使用干冰冷藏。如果储藏GelNestTM基质胶的冰箱带有自动除霜功能，冰箱除霜过程中升温，可能使基质胶成胶。所以，切忌将GelNestTM基质胶储藏于此类冰箱中。
为保证GelNestTM基质胶的使用效果，冻融次数应该尽可能减少。拿到新的GelNestTM基质胶后，请按照单次用量进行分装。每次融化操作，GelNestTM基质胶都应该放置于冰上。

15.为什么GelNestTM基质胶在37°C成胶，而在4°C时却呈液体状态？
GelNestTM基质胶是一种从小鼠肿瘤中提取的重组基底膜，新鲜提取的原料中主要包括以下成分：层粘连蛋白，IV型胶原,巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生长因子、类胰岛素生长因子及其他生长因子。
这些蛋白构成了GelNestTM基质胶的基本结构。在22℃-37℃温度条件下，大分子间的共价键可以结合，促使GelNestTM基质胶形成凝胶。而在低温条件（如4℃）下，由于没有足够的能量促使共价键结合，所以GelNestTM基质胶呈现液体状态。

16.GelNestTM基质胶可以反复冻融吗？
建议用户第一次融化后按照单次用量进行分装，保存。

17.为什么细胞没有贴壁？GelNestTM基质胶也脱落了？
首先需要检查细胞的接种浓度是否过高，GelNestTM基质胶的用量应等同于细胞培养体系中培养基的用量。如果GelNestTM基质胶被稀释到过低的浓度，形成的胶体容易从组织培养器皿表面分离。

18.未稀释的GelNestTM基质胶中出现的沉淀应该怎么样处理？
4℃下低速离心，去除沉淀物。

19.未使用完的GelNestTM基质胶应该怎样保存的？
与细胞培养基或缓冲液混合过但未使用完的GelNestTM基质胶，不建议保留再用。

20.GelNestTM基质胶可以储存在-70℃吗？
是的。GelNestTM基质胶可以储存在-70℃。建议客户将整瓶的GelNestTM基质胶进行分装，储存于聚丙烯或其他可以耐受超低温条件材质的小管中，方便保存和使用。

21.GelNestTM基质胶会有自发荧光吗？
GelNest基质胶是一种蛋白混合物，所以GelNestTM基质胶可能引发荧光的组分为蛋白质成分。如果需要使用荧光检测细胞生长状态，建议使用者建立对照实验，在所需要的波长条件下进行对比，以便排除背景荧光。

22.使用GelNestTM基质胶培养的细胞，如果需要进行切片或者免疫组织化学及免疫荧光检验，该怎样固定呢？如何避免解聚？
可以使用2%浓度的多聚甲醛进行固定。为避免固定后出现解聚的情况，可以加入1%浓度的戊二醛。戊二醛作为固定剂，常用于电镜观察。
如果用户需要进行免疫荧光检验，加入戊二醛后，会出现明显的背景荧光。为了解决这一问题，我们建议用户在固定之后，使用NaBH4进行淬灭。NaBH4极易产生气泡，进行该步骤时，必须在水平操作台上小心操作，避免晃动，尽量减少气泡的形成。另外，用户也可以尝试使用较低浓度的戊二醛进行固定，如0.1%到0.5%，浓度越低，背景荧光信号越少。

23. 为什么GelNestTM的颜色不一样？
因为二氧化碳和碳酸氢盐缓冲液及酚红的反应，冷冻或刚融解的GelNestTM都有可能呈现不同颜色，颜色从稻草黄到暗红色不等。
酚红在冷冻或者酸性环境下呈现明黄色，在接近生理pH值或0ºC以上呈现红色。
GelNestTM出现颜色上的区别是正常情况，不会影响产品质量，并且在和5%的二氧化碳平衡后，会恢复到统一颜色。