心肌缺血再灌注模型构建

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随着我国老龄化社会的形成，心脑血管疾患逐渐成为严重影响人们生命健康的最主要疾病。心肌缺血将导至心肌细胞不可逆性坏死，被称为心肌梗死。作为终末分化细胞，大面积心肌细胞梗死将导至严重心脏功能不全危及患者生命及时恢复缺血心肌组织的血液灌注一“再灌注”是治疗急性心肌梗死唯一有效的方法。然而，当缺血心肌再次获得血液灌注后将导至比同时间单纯缺血更加严重的心肌损害，这一矛盾的现象被称为再灌注损伤。心肌缺血再灌注损伤是心肌梗死PCI治疗以及心脏手术后心功能不全的主要病理生理基础上。

一、动物的选择

大鼠品系：SD、Wistar；

小鼠品系：C57BL/6、BALB/C；以及其他品系；周龄：6-8周；性别不限。

二、造模方法

今天现场教学，大鼠心肌缺血再灌注模型。

1、准备实验所需手术器材：10%水合，1ml注射器，碘伏，棉棒，电推子，手术板，4根皮筋，剪刀，大眼科弯镊2把，持针器1把，止血钳1把，6-0带针缝合线，3-0缝合线，缝合针，电子秤，呼吸机。

2、选择状态较好的SD大鼠，雄性，220-250g，称重醉后仰卧用皮筋固定手术板上。胸骨左侧剃毛，剃毛处擦碘伏消毒。胸骨左侧纵向剪开皮肤4厘米，钝性分离皮下肌肉，在分离三和四肋间暴露出胸膜。  

3、胸骨左侧纵向剪开皮肤4厘米，钝性分离皮下肌肉，在分离三和四肋间暴露出胸膜。用镊子撕开胸膜进入胸腔，用止血钳撑开肋骨，暴露出心脏。

4、用镊子轻轻撕破心膜，用止血钳轻轻把心脏夹出（操作过程中不要碰到肺）。用6-0缝合线结扎，（结扎位置与左心耳尖平行处）轻轻将心脏放回胸腔。  

5 、观察心脏里面有无出血。无出血后用3-0缝合线逐层缝合，缝合结束后擦拭碘伏消毒，然后拔出呼吸机，将大鼠放回笼内。

6、如果需要做缺血再灌注模型时，再第4步结扎时加入特制线栓，缺血相应时间后拔去线栓，制成心肌缺血再灌注模型。

三、模型验证

1、肉眼观察

结扎成功后肉眼见左心室前壁变青紫或苍白，搏动减弱，心电图呈示 ST 段抬高为心肌缺血造模成功标志。

2、心电图测试

心肌缺血成功标志：心电图表现ST段抬高和（或）T波高尖或倒置呈弓背向上抬高，各种心律失常。

再灌注成功标志：再灌注后，抬高的ST段下降>50%，或高尖的T波下降。且再灌注初起时虽出现心律失常、室速、室颤等情况，但之后心率异常逐渐消失，心率逐渐趋于平稳且维持数小时，提示心肌再灌注模型成功。

3、TTC染色观察

左侧是正常心脏TTC染色，右侧是缺血再灌注心脏TTC染色，梗死面积明显增大。梗死的心肌组织呈白色，不能被TTC染色；危险区呈红色，被TTC染色，代表缺血但是还活着的心肌组织，可作为缺血再灌注损伤指标。

4、血生化检查

外周血中LDH（乳酸脱氢酶），CKMB（肌酸激酶同工酶）的含量测定。