手把手教你非酒精性脂肪性肝炎（NASH）动物模型构建

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非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一种无酒精滥用的肝病综合征，包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化和肝硬变。可从单纯性脂肪肝经非酒精性脂肪性肝炎（NASH）发展为肝纤维化，甚至导至肝硬化、肝细胞癌（HCC）或肝功能衰竭等终末期肝病。

一、模型动物的选择

常用的实验动物有大鼠、小鼠、家兔等，其中大鼠和小鼠的应用最为广泛，大鼠以 Wistar 和 Sprague Dawley（SD）为代表；小鼠的品系则更加多样，其中C57BL/6J 最常见。

二、模型构建方法

NASH模型主要有膳食动物模型【高脂饮食（high-fat diet, HFD）模型、蛋氨酸和胆碱缺乏（methionine-choline deficient, MCD）饮食模型、高胆固醇和高胆酸盐（high-cholesterol and high-cholate, HCh Ch）模型】、化学诱导模型【四氯化碳（CCl4）诱发模型、乙硫氨酸诱发模型、高糖高脂饮食+链脲佐菌素（STZ）诱发模型】、基因修饰动物模型（DB/DB小鼠和OB/OB小鼠、Foz/Foz小鼠、SREBP-1c转基因小鼠）等。

下面将常用的NASH模型的建模方法进行总结梳理。

1、高脂饮食（HFD）模型

高脂高果糖高胆固醇饮食，模拟人类疾病形成机制，周期较长。

造模方法：

大、小鼠使用D09100301（起酥油版本）或者D09100310（棕榈油版本），动物不会很胖，造模周期14周左右，可用于NASH模型构建。

2、蛋氨酸限制、胆碱缺乏饮食，成模周期短，肝炎、肝纤维化。

造模方法：

1）MCD（蛋氨酸、胆碱缺乏饮食），MRCD（蛋氨酸微量、胆碱缺乏饮食），造模周期4-8周，实验动物状态较差、逐渐消瘦，甚至死亡；

2） HFMRCD（45%脂肪供能或60%脂肪供能基础，蛋氨酸微量、缺乏及胆碱缺乏饮食），造模周期4-6周，实验动物可有效保持体重，生存周期也会延长。

3、四氯化碳（CCl4）诱导

CCl4是最早采用的试验性脂肪肝模型诱导剂，可单独施用或配合高脂饮食来诱发脂肪肝或肝纤维化。

四氯化碳（CCl4）具有肝毒性，进入机体后在肝内产生活化氧自由基，过氧化作用增强，加快肝脂肪变性进程，损伤肝细胞，造成肝细胞变性坏死，引起细胞外基质（ECM）过度沉积而成肝纤维化，其代谢产物还可以刺激肝脏Kupffer细胞，释放促炎性细胞因子，进一步加重肝脏的损伤。

这种方法造模时间较短（8周左右），形成率高。适用于肝纤维化的研究。但是发病机制、病程变化及组织学形态与人类脂肪肝存在较大差异，并且CCl4具有较强的毒性，易致动物死亡。

4、四环素诱导

四环素属于抗生素类药物，具有肝毒性，可用于诱发动物脂肪肝。其主要通过干扰线粒体DNA复制或转录，抑制载脂蛋白合成并影响线粒体脂肪酸β-氧化，抑制肝脏极低密度脂蛋白的释放，脂质以脂滴形式聚于肝细胞内，继而造成肝细胞脂肪变性。

该模型造模时间短，费用低，药物毒性较CCl4弱，脂肪变性显著，适用于模拟某些环境因素所致的NAFLD研究，也具有CCl4类似的缺点。