实验步骤
1、吸去旧培养液。
2、PBS冲洗3次,每次2ml。
3、吸去PBS,胰酶1.5ml,放入孵育箱,消化4min后取出观察细胞悬浮情况。
4、3ml培液中止消化,轻轻吹打至底壁透光,制成细胞悬液。
5、吸入15ml离心管中,1000r/5min离心。
6、吸去上清,加入1ml冻存液(冻存液配制方法:DMSO和血清按1:9配制成10ml,离心管外面裹一层铝箔避光,放入4度冰箱保存),吹打均匀,吸入冻存管中。
7、放入梯度降温盒,-80℃冰箱过夜。
8、24h后从梯度盒取出冻存管,放入液氮罐保存(长期保存需放入液氮罐,短期3个月内冻存放入-80摄氏度即可)。
|