干货分享 | 一文了解提取的核酸用哪个观测指标？

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提取完DNA或[color=var(--weui-LINK)][url=]RNA[/url]之后，通常需要测浓度，这也是质检的主要方法。在分光光度计上进行的[color=var(--weui-LINK)][url=]吸光度[/url]测量包括样品中在不同波长处吸收的所有分子的吸光度。由于核苷酸、RNA、[color=var(--weui-LINK)][url=]单链DNA[/url]和双链DNA都在260 nm处吸收，因此它们将检测样品的总吸光度。观测指标也就是260/280 and 260/230 Ratios，所以下面分别介绍：

260/280 Ratio

260 nm和280 nm处的吸光度比用于评估DNA和RNA的纯度。通常认为~1.8的比例是DNA的“纯”比例；一般认为~2.0的比率为RNA的“纯”。如果这两种情况下的比率明显较低，则可能表明存在蛋白质、[color=var(--weui-LINK)][url=]苯酚[/url]或其他污染物，这些污染物在280 nm处或附近强烈吸收。

260/230 Ratio

这个比率被用作核酸纯度的第二个衡量标准。“纯”核酸的260/230值通常高于相应的260/280值。预期的260/230值通常在2.0-2.2范围内。如果该比率明显低于预期，则可能表明存在在230 nm处吸收的污染物。

图1 核酸的典型光谱模式

图2 EDTA光谱模式（碳水化合物和苯酚的吸光度都在230nm附近。）

图3 TRIZOL光谱模式（TRIZOL试剂是一种酚类溶液，在230 nm和~270 nm的紫外线下都能吸收。）

图4 Guanidine HCl光谱模式（用于DNA分离的盐酸胍将在约230 nm处吸收）

图5 Guanidine Isothiocyanate光谱模式（用于RNA分离的异硫氰酸胍将在约260 nm处吸收）