噬菌体展示技术流程和原理详解

xiaoqin

噬菌体展示技术是一种筛选技术，通过基因工程技术将外源蛋白或多肽的基因序列插入到噬菌体，进行多轮筛选，最终在体外获得具有高特异性和高亲和力的重组抗体。

噬菌体展示技术原理

噬菌体展示技术（phage display）是将外源编码多肽或蛋白质的基因通过基因工程技术插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框能正确表达，使外源多肽或蛋白在噬菌体的衣壳蛋白上形成融合蛋白，随子代噬菌体的重新组装呈现在噬菌体表面，可以保持相对的空间结构和生物活性。

然后利用靶分子，采用合适的淘洗方法，洗去未特异性结合的噬菌体。再用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体，中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增，经过3-5轮的富集，逐步提高可以特异性识别靶分子的噬菌体比例，最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。

噬菌体抗体库的构建和筛选技术流程：

噬菌体展示技术中，M13、f1、fd噬菌体是最常用的噬菌体，属于Ff家族。与展示密切相关的有两种结构蛋白质：主要衣壳蛋白pVIII（或gp8）和次要衣壳蛋白pIII（或gp3）。pIII含有5个拷贝，以较低的价态存在； pVIII含有2700个拷贝，以较高的价态存在。因此，pIII有利于筛选具有较高亲和力的配体，pVIII可用于筛选具有较低亲和力的配体。

该技术实现了基因型与表型的统一，目的基因（粉红色）被克隆至噬菌体DNA的pIII基因，其产物（抗体、肽）以融合蛋白的形式展示到噬菌体的表面。

噬菌体展示技术的筛选过程包括：

（1）一个包含106~1011个克隆的噬菌体文库与包被抗原孵育。

（2）清洗并除去未结合的噬菌体。

（3）洗脱与抗原结合的噬菌体。

（4） 洗脱下来的噬菌体在辅助噬菌体的帮助下感染大肠杆菌从而扩增洗脱下来的候选噬菌体。

（5）将细胞接种到可筛选的平板上并进行扩增。以上步骤重复2-3次，使得与目标抗原结合噬菌体被富集。

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噬菌体展示技术：https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody