Myc标签序列及常见问题解析

xiaoqin

Myc标签是来源于c-myc基因产物的多肽蛋白标签，可以通过重组DNA技术融合到蛋白的C端或N端。它可以促进标签蛋白的亲和纯化以及标签蛋白的分离和检测。

Myc标签的多肽序列是：EQKLISEEDL（或写作-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-）。Myc标签包含10个氨基酸，Myc标签（EQKLISEEDL标签）多肽的分子量是1202 Da。

Myc标签实验中常见的问题解析：

1、流穿中有目的蛋白

①填料过载

推荐解决方案：减少上样体积或增加填料体积。

②结合时间太短

推荐解决方案：延长样品和填料的结合时间，可过夜孵育。

③标签未暴露

推荐解决方案：可以加入低浓度的变性剂，上样前透析。

④溶液中试剂不兼容

推荐解决方案：样品上样前进行透析。

2、洗脱组分中没有目的蛋白

①目的蛋白不稳定

推荐解决方案：使用新鲜样品、低温操作、细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。

②目的蛋白表达量太低

推荐解决方案：优化蛋白表达量、增加上样量，减少缓冲液中NaCl浓度。

③样品中无标签融合蛋白

推荐解决方案：纯化前Western检测是否有c-myc标签蛋白

3、背景太高

①非特异性吸附

推荐解决方案：最后一次洗杂后，填料转到新的管子里再洗脱或IP。

②洗杂不充分       

推荐解决方案：增加洗杂次数，每次清洗孵育5-10min、增加洗杂液中盐离子浓度。

4、纯化后，如何裂解Myc标签？

在某些应用场景希望可以去除Myc标签，例如用于蛋白的结晶。为了允许Myc标签裂解，需要在标签和蛋白之间设计一个蛋白酶裂解位点。在Myc标签后面的EK裂解位点（Myc-EK位点-蛋白结构）可以使Myc标签和裂解位点完全去除，在 Myc标签的特异裂解后不留下任何额外的氨基酸。关于EK和HRV-3C蛋白酶的裂解位点和标签去除的更多信息。

Myc标签（EQKLISEEDL 标签）已广泛应用于重组蛋白的表达和生产。Myc标签允许使用连接在琼脂糖珠上的Myc标签特异性抗体对被标记的蛋白进行简单而有效的亲和纯化。Myc标签（EQKLISEEDL 标签）也可通过使用Myc标签特异性抗体用于western blot检测。可以添加Myc标签到蛋白的C端或N端，用于在几乎所有的表达系统中表达。

义翘神州已成功生产许多Myc标签蛋白，并通过Myc标签亲和色谱法进行纯化。义翘神州在根据蛋白结构设计Myc标签方面具有丰富的经验，并可处理蛋白纯化过程中出现的任何问题。义翘神州还开发了高灵敏度的Myc标签（EQKLISEEDL 标签）特异性抗体，用于western blot、ELISA、免疫荧光和免疫沉淀检测。义翘神州也开发了自己的Myc标签（EQKLISEEDL 标签）亲和纯化树脂。详情可以关注：https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/myc-tag-protein-production