什么是CAR-NK细胞疗法?CAR-NK细胞制备过程详解

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什么是CAR-NK细胞疗法?

自然杀伤（NK）细胞是具有高度细胞毒性的非特异性免疫效应细胞，具有消除肿瘤细胞和感染病毒细胞等异常细胞的能力。CAR-NK细胞疗法在血液瘤和实体瘤中发挥显著的效果，与CAR-T疗法相比，CAR-NK细胞疗法更安全，引起细胞因子释放综合征（CRS）和移植物抗宿主病（GVHD）的可能性更低，具有更强的抗肿瘤活性，是一个现货免疫细胞的理想选择。CAR-NK细胞的来源广泛，包括脐带血（UCB）、外周血（PB）、人诱导多能干细胞（hiPSCs）、人胚胎干细胞（hESC）、造血干细胞（HSC）和NK细胞系。

CAR-NK细胞的制备过程：

• 对不同来源的NK细胞进行分离和制备时，可以用CAR表达载体（如慢病毒）进行修饰；

• 在特定的扩增培养基中扩增NK细胞；

• 建立的CAR‐NK细胞通常采用静脉注射，以选择性杀死肿瘤细胞。

CAR-NK细胞疗法整体解决方案

义翘神州为制药公司提供综合性的CAR-NK细胞疗法开发解决方案，包括从CAR开发、NK细胞获取和表征、NK细胞活化和扩增、NK细胞纯化、CAR-NK细胞制备到CAR-NK细胞质量控制的每一阶段。

①CAR开发：

CAR可特异性识别肿瘤细胞表面抗原并与其结合，因此获得高质量CAR是开发中的关键步骤。基于15+年的经验积累和技术沉淀，义翘神州建立了四大抗体开发平台（噬菌体抗体库、杂交瘤、流式单B细胞、Beacon®B细胞）满足scFv发现的需求。同时我们还提供用于scFv筛选和CAR亲和力检测的多种CAR-NK靶点蛋白和SPR/BLI亲和力检测服务，支持CAR-NK研究。

②NK细胞获取和表征：

NK细胞源于脐带血（UCB）、外周血（PB）、人诱导多能干细胞（hiPSCs）、人胚胎干细胞（hESC）、造血干细胞（HSC）和NK细胞系。由于NK细胞来源广泛，需要对NK细胞进行分离，清除T细胞、B细胞或其他污染物。

NK细胞被定义为CD3-CD16+CD56+的淋巴细胞。根据NK细胞表面标志物CD16和CD56的差异性表达，可将NK细胞划分为两个亚群CD56brightCD16dim/− 和CD56dimCD16+。根据这些不同的表面标志物，利用流式抗体进行检测从而区分NK细胞亚群。义翘神州已开发高质量的CD3、CD16、CD25、CD56和KIR2DL1流式抗体，可有效分离和表征NK细胞群或亚群。

③NK细胞活化和扩增：

在外周血白细胞中，只有约5%-15%为NK细胞，如何获得足够的NK细胞仍是患者采用免疫治疗的主要挑战。从NK细胞活化阶段进行高效的NK细胞转导，以诱导细胞增殖。目前NK细胞培养存在多种培养方式，应用最广泛的两种方法为饲养层细胞培养和细胞因子培养。

GMP级细胞因子

相关法规明确规定，对于细胞治疗药物中原材料的选择，应尽量采用符合药典标准的原材料或批准上市的药品，优先级是：药品级＞GMP级＞RUO级。GMP级细胞因子对于NK细胞的发育和存活具有重要调节作用，如IL-21能诱导NK细胞的成熟，并增强其细胞毒性。GMP级细胞因子作为重要原料应用到CAR-NK药物开发过程中，可在体外扩增过程中高效激活NK细胞。义翘神州严格遵循GMP质量管理体系，成功开发出高质量、高活性的GMP级细胞因子：IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21，助力CAR-NK细胞培养。

④CAR-NK细胞制备：

慢病毒包装是CAR-NK细胞制备的关键环节。影响慢病毒包装是否成功的因素包括载体系统、转染试剂和慢病毒滴度等。义翘神州提供高品质的无血清HEK293培养基、Sinofection®转染试剂和超级核酸酶，用于慢病毒载体的高效转染。同时我们还提供细胞库检测服务和核酸酶残留检测试剂盒，满足CAR-NK细胞制备需求。

⑤CAR-NK细胞质量控制：

为确保CAR-NK细胞治疗产品的安全性，需要进行严格的质量控制检测，包括活细胞比例检测、细胞群或亚群检测、CAR阳性率检测和杀伤效力评价等。义翘神州提供高质量的产品和服务，支持CAR-NK细胞质量控制检测。

更多详情可以参看：https://cn.sinobiological.com/category/solutions/car-nk-therapy