实验干货 | 结核分枝杆菌感染实验室检查

宋宋030688

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）是经典致病菌，引起肺结核和肺外感染。结核病是目前全球感染性疾病死亡的主要原因。

结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex，MTBC）

该菌是细长、直或稍弯曲、两端圆钝的杆菌，长约1~4 μm，宽约0.3~0.6 μm，抗酸染色阳性，可致结核病。结核分枝杆菌复合群包括MTB、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、卡内蒂分枝杆菌和田鼠分枝杆菌等。非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria，NTM）是指分枝杆菌属中除结核分枝杆菌复合群及麻风分枝杆菌以外的菌种。

涂片显微镜检查

用于涂片显微镜检查的临床标本，包括但不限于呼吸道标本（痰、咽喉拭子、支气管肺泡灌洗液、支气管毛刷等）、胸腔积液、腹腔积液、尿液、脑脊液、胃液、脓液（分泌物、穿刺液等）、穿刺物、病理组织、粪便等。对于痰标本，采用5%次氯酸钠液化后离心浓缩，沉淀物涂片染色可有效增加阳性率，对于未采用分子生物学或培养等手段的实验室非常重要。对于体液标本，含有的MTBC的数量很少，涂片本身价值非常有限，一般推荐浓缩后涂片。但是浓缩过程存在生物安全风险，且MTBC的比重与水相近，有一部分MTBC会存在于上清液中，离心未必有效提高检出率。因此在实验室有条件时应尽可能采用更灵敏的手段进行MTBC检测。目前较为实际的方法是，对肉眼所见清亮的体液标本，优选细胞离心甩片机浓缩制片，也可使用普通离心机。对于脑脊液，标本量充足时建议至少用5 ml标本。当标本混浊、血性或脓性，可直接涂片不离心。浓缩的标本在进行半定量报告时，建议备注为“浓缩标本”。胸腔积液时，优选胸腔活检组织用于MTBC微生物学检查。

1.萋-尼抗酸染色和显微镜检查：该方法采用萋-尼抗酸染色液对临床标本涂片染色后，用普通光学显微镜或发光二极管显微镜进行观察。

2.荧光染色和显微镜检查：该方法利用金胺“O”染料对抗酸杆菌进行染色。该方法阅片时间较短，一般为1~3 min，可减轻工作强度。荧光染色后的标本要立即观察，否则应将玻片标本置于2~8 ℃黑暗中以减少淬灭对结果的影响。结果分级报告标准见表1。

涂片镜检具有操作简单、检测迅速、对硬件设施要求不高等优点。

涂片镜检的缺点包括：不能区分菌体的死活，无法开展后续的药物敏感性试验；只能检测标本中是否存在分枝杆菌，不能区分MTB和NTM，检测结果阳性还需进一步明确。我国“MTB分离株”中最后鉴定为NTM的比例约22.9%。很多NTM可呈现一定程度的抗酸性，其他如红球菌属、诺卡菌属、米克戴德军团菌、隐孢子虫属的包囊、等孢子虫、环孢子虫和微孢子菌属孢子，也有某些程度的抗酸性。≤10%的快生长分枝杆菌有抗酸性但不被荧光素着色。因此，对于有肺结核症状和体征的患者，建议采用快速分子生物学方法（如Xpert MTB/RIF等）作为涂片的替代方法用于结核病及耐药结核病患者病原学检查的首选方法。