从理论上来说,载体的构建没有太大的技术难度,但是它的成功与否有时候是一个玄学的过程,有一定程度上的运气成分,有时候“胡乱”操作一通反而莫名其妙地构上去而且转化成功了。那么在具体的应用中,质粒载体和病毒载体有哪些异同?
01 进入细胞方式不一样
质粒通过转染进入目的细胞,病毒通过感染进入目的细胞,特异性更强,且效率更高。
02 所搭载的序列形式及其发挥功能的方式可能不一样
质粒DNA所搭载的目的序列是DNA,并且DNA通常需要进入细胞核才能行使相应的功能;病毒载体搭载的序列可以是DNA,也可以是RNA,而RNA序列通常不需要入核行使功能,并且如果是进行宿主基因组的同源重组,病毒载体效率更高。
03 包装、提纯方式不一样
质粒通常是在原核细胞内进行扩增后提纯;病毒载体通常在真核细胞内包装后逐步扩大培养后裂解细胞/收集上清后提纯获得。
04 保存方式不一样
质粒通常稳定性非常好,对温度不敏感;
病毒不一样,一般需要低温冷冻保存对温度很敏感,反复冻融对活力影响也非常大。
05 在疫苗应用不同
质粒DNA作为DNA疫苗的载体,通常免疫原性较低,需要使用脂质体或者电击枪用于增强DNA进入细胞;
病毒载体疫苗免疫原性较好,通常很容易诱导较强的抗体和T细胞免疫原性,但往往受限于预存免疫。