实验干货丨微生物学检测——菌落总数

与光同辉

菌落总数又称需氧菌总数、嗜氧菌总数，在英文标准中的术语有Total plate count, Standard plate-count bacteria, Aerobic bacterial count，Colonies number等，是微生物学检测技术中应用最广泛的一种卫生学检测技术，亦是嗜温细菌和真菌的菌落总计数，其通过一定条件下如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等，每单位（如克、毫升等）检样所生长出来的微生物，在卫生学上可以表示被污染程度的标志。
常见操作方法


菌落计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（Most-Probable-Number Method，简称MPN法），其中平皿法可分为倾注平皿法和涂布平皿法.
样品的取样量与稀释液选择


样品的取样量与其质量标准或测试方法去选择，对于官方标准未明确取样量的，亦可根据结果的代表性加大取样量。稀释缓冲液的选择则是要求样品在稀释缓冲液中能够充分混合，从而保证样品的均一性，故不同样品，会有不同的稀释液需求。
常见培养条件


菌落总数的培养条件会因不同的样品类型或制定机构而有所差异，其差异包括培养基、培养温度和培养时间的选择。
结果观察与报告


菌落总数在进行计数时，肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（CFU/cfu，Colony Forming Units）进行报告。在计数时，首先需明确计数范围是否符合要求，从而保证测试结果的准确性和可靠性，不同的测试方法在首选计数范围会有一定差异，以及显色剂在观察中的应用也有一定的要求。
菌落总数的测定，不同样品有不同的特性，故在进行此方面卫生学测试时，结合行业需求，以及样品的生产工艺、消费对象、使用方式等需求，选择合适的测试操作流程，同时保证在报告结果时，亦需根据市场所选用的方法进行报告结果。





综合以上，卫生学的菌落测试在实验操作中虽然有差异，但总体的差异性不大，比如培养基都是非选择性生长培养基，培养温度基本在35℃左右，培养时间则温度越高，时间则可减少。故保证菌落总数测试结果的准确性与可靠性时，根据实际需求，通过调节测试方法的取样、稀释液、培养条件等来建立更符合本实验室的菌落总数测试方法。